SNRPB (Small Nuclear Ribonucleo protein Polypeptides B)是剪接体小核核糖核蛋白的核心成分,可以协调剪接体的剪接。有研究表明,SNRPB能够影响大量与癌症相关的生物学过程,如RNA加工,DNA修复等,与癌细胞的生长息息相关。癌症是威胁人类健康的最严重的疾病之一,癌细胞可无限快速增殖,但处于快速生长期的鹿茸生长中心细胞的分裂速度却是其30多倍,如果了解了的鹿茸角增殖机理,将这种机制应用到癌症治疗上,有可能为癌症的治疗提供新的思路和方向。本研究根据Genbank中牛的基因序列设计了 SNRPB基因的同源引物,采用RT-PCR技术和DNA分子克隆技术成功获得梅花鹿SNRPB基因的cDNA序列;通过实时荧光定量PCR技术,检测SNRPB基因在梅花鹿鹿茸顶端间充质组织生长前,中,后期的相对表达量;构建SNRPB基因的真核表达载体并转染293T细胞,通过实时荧光定量PCR技术测定在293T细胞中SNRPB基因的过表达。实验结果如下:1.试验获得SNRPB基因序列长度为783bp,共编码240个氨基酸,有典型性的Lsm结构域。通过对测序结果进行核苷酸序列对比分析发现,梅花鹿SNRPB基因与白尾鹿、牛和绵羊CDS区序列相似性都较高,分别为99%、97%、97%,证明该基因在进化上相对较为保守。通过系统发育树的构建发现:梅花鹿与白尾鹿、牛、绵羊的演化距离较近,与野猪、鲸的演化距离稍远,与黑猩猩、骆驼、旱獭的演化距离较远,这一进化特点也符合经典分类学观点。2.SNRPB基因在梅花鹿鹿茸顶端间充质组织生长前,中后期的相对表达量存在明显差异,表现为前期表达量最高,中期表达量最低。3.构建真核表达载体,并用重组真核表达载体pEGFP-C1-SNRPB和空载体瞬时转染到293T细胞后,在荧光显微镜下观察到大量绿色荧光,使用Real-time PCR检测发现,实验组SNRPB基因的表达量是对照组的约367倍。说明pEGFP-Cl-SNRPB真核表达载体在293T细胞中mRNA水平成功表达。