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本研究以‘魏可’葡萄(Vitis vinifera L.Wink)为试材,由大田植株获得其无菌系组培苗,并建立高效的再生体系,在此基础上建立根癌农杆菌转导‘魏可’葡萄的遗传转化体系,并采用花粉管通道法对大田植株进行转化,以期为‘魏可’葡萄的品种改良和种质创新打下基础。本实验探讨了影响‘魏可’葡萄再生效率和遗传转化效率的各个因素,研究结果如下：1.研究了不同激素配比、外植体类型及暗培养时间等对其器官再生效率的影响。结果表明：细胞分裂素TDZ对‘魏可’葡萄叶片的再生效果比6-BA好；暗培养时间为2周或3周时,‘魏可’葡萄叶片可获得较高的再生率；除幼根外,叶片、叶柄、茎段外植体均可再生出不定芽。叶片在MS+4mg/L TDZ+0.1mg/L IBA上培养,不定芽再生率可达78.74%±1.60,增殖系数为6.75+0.75;叶柄在MS+2mg/L TDZ+0.1mg/L IBA上培养,不定芽再生率为39.330%±1.47,增殖系数为3.55+0.50；茎段的最适激素组合为MS+2mg/L TDZ+0.1mg/L IBA,再生率达41.37%±1.13,增值系数为4.74±0.64。暗培养0到4周处理中,暗培养2周或3周,叶片外植体可获得较高的再生率。再生不定芽置于3/4MS+0.35mg/L IBA培养基上诱导生根,可获得完整的植株。植株继代培养35-50天后炼苗移栽,成活率可达90%。2.以‘魏可’葡萄离体叶片作为根癌农杆菌介导转化nptⅡ基因的受体,对农杆菌侵染时间、共培养时间、卡那霉素选择压及羧苄青霉素浓度等因素进行了研究。结果表明：农杆菌侵染4min,共培养3d,卡那霉素选择压5mg/L,羧苄青霉素浓度200mg/L,是根癌农杆菌介导‘魏可’葡萄遗传转化体系的较优组合。3.采用农杆菌介导转化体系对‘魏可’葡萄进行遗传转化,获得了9个掘}性株系,利用PCR扩增检测,有4个株系呈阳性,其中1个株系RT-PCR检测呈阳性。将PCR产物回收,经测序验证nptⅡ因已经完全整合进入‘魏可’葡萄基因组中。对CK及经PCR检测呈阳性的株系进行卡那霉素抗性鉴定,发现在Kan为5mg/L时,PCR呈阳性的株系抗性均明显强于CK,初步证明整合进入‘魏可’葡萄的nptⅡ因得到了表达。4.以‘魏可’葡萄花序为农杆菌介导转化nptⅡ基因的受体,利用花粉管通道法对‘魏可’葡萄花序进行转化,将所得种子播种,共获得140个后代单株。利用PCR及RT-PCR方法对其中70个单株进行检测,得到8个PCR阳性单株,2个RT-PCR阳性单株。将CK和PCR阳性单株的叶片采下分别接种在培养基MS+Kan20mg/L+琼脂5.5g/L上,7d后观察叶色变化,发现CK叶片变黄,且部分褐化,而PCR呈阳性的单株叶片仍保持绿色,初步说明整合进入‘魏可’葡萄的nptⅡ因得到了表达。