植物内生细菌的分离筛选及其与植物联合修复土壤多环芳烃的研究

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随着全球工业化和现代化的发展,煤、石油在工业生产,交通运输以及生活中被广泛应用,导致土壤中多环芳烃污染日益严重,成为一个亟待解决的问题。微生物与植物联合修复土壤中多环芳烃具有绿色廉价的作用,而且有着微生物或植物单一修复无法比拟的优点,而本实验采用的植物内生细菌与植物联合修复更能强化微生物与植物的优点,具有重大的理论和现实意义。本研究从南京长期受石油污染地区的水花生和野蒜中分离出植物内生细菌36株,根据平皿促生试验中多环芳烃去除率和促生效果,并结合植物体内定殖效果筛选出菌株7J2作为菲污染修复的功能菌株,筛选出菌株12J1作为芘污染修复的功能菌株。通过生理生化实验结合16SrDNA的序列测定和比较得出7J2、12J1均属于肠杆菌属(Enterobacter spp.)。对功能菌株的生物学特性进行了研究,结果表明:菌株7J2、12J1具有溶磷、分泌IAA和产生铁载体的能力。菌株7J2在菲30 mg·L-1的条件下,28℃振荡培养6d,菲的降解率达到99.81%;菌株12.11在芘5 mg·L-1的条件下,28℃振荡培养7d,芘的降解率达到83.75%。环境因素对功能菌株生长影响的试验表明菌株7J2和12J1能在温度4-45℃和pH4.0-11.0范围内生长,生长最适温度20-37℃,最适pH为7.2-9.0,供试菌株对高渗环境适应性强,均能在5%的盐浓度下生长。菌株对重金属具有不同的抗性,在Pb2+、Cr2+、Cu2+、Ni2+、Zn2+、Cd2+条件下,菌株7J2的致死浓度分别为3000、10、5、10、1500、50 mg·L-1,菌株12J1的致死浓度分别为3000、10、10、20、2500、50 mg·L-1。菌株对抗生素具有相同的抗性,7J2和12J1均能在含Km 10 mg·L-1、Amp 100mg·L-1、Str 10 mg·L-1、Tc 10 mg·L-1、Rif 20 mg·L-1、Spe 10 mg·L-1的培养基中良好生长。植物内生细菌和植物联合修复土壤中多环芳烃的试验表明,在菲(200 mg·L-1)污染土壤、芘(100 mg·L(-1))污染土壤及菲芘(其中菲200 mg·L-1,芘100 mg·L-1)混合污染土壤中,接菌处理的植物生物量明显高于不接菌处理,其中菲对植物的毒害作用最小,其次是芘,菲芘混合污染的毒害作用最大。接菌种植物处理的多环芳烃去除率要高于单纯植物修复和微生物修复,且明显高于对照处理。种植物土壤中转化酶、多酚氧化酶、脲酶活性明显高于不种植物土壤;种植物的土壤中接菌处理的三种酶活性明显高于不接菌处理。采用选择性培养基进行分离计数,发现菌株7J2和12J1可以在玉米和小麦根际定殖。随着盆栽实验的进行,土壤中细菌、真菌数量逐渐增大。植物内生细菌7J2、12J1在小麦体内的存活时间较长,60天后仍然可从小麦体内分离到,其最佳存活时间是25天以内;植物内生细菌7J2、12J1在玉米体内的存活时间较长,30天后仍然可从玉米体内分离到,其最佳存活时间是20天。
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