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本论文对流式细胞法分离波尔山羊X、Y精子进行了初步研究,实验包括3部分,精子的染色,Percoll梯度的优选及精子流式细胞法的分离。 实验一、用荧光染料Hoechst33342处理对波尔山羊精子质量的影响。 实验共分一个对照组和四个实验组,精子在荧光染料浓度分别为实验组Ⅰ5.0mg/l,Ⅱ7.5mg/l、Ⅲ10mg/l、Ⅳ12.5mg/l的各处理中孵育60min。精子活率、死活精子比率和顶体完整率方面,实验组Ⅰ、Ⅱ与对照组比较差异不显著(p>0.05),实验组Ⅲ、Ⅳ与对照组比较差异显著(p<0.05);测定精子存活时间实验中,实验组全部与对照组比较差异显著(p<0.05);因此,染色液浓度大于7.5mg/l时,对精子损伤较大。 实验二、双层Percoll密度梯度离心对波尔山羊精子优选效果分析。 通过45%-90%双层Pcrcoll密度梯度离心优选染色后精子,顶体完整率(61.6%±14.5%和84.6%±12.4%;P<0.01和低渗肿胀率(64.3%±8.4%和86.2%±7.1%;P<0.01)与染色后精液比较均有极显著差异。梯度离心明显优选出了质量较好精子,因此,可以应用在流式细胞分析的精子预处理过程。 实验三、流式细胞法分离波尔山羊X、Y精子。成功使用流式细胞仪筛选出了X和Y精子,速度超过1,000/s,得出了较为理想的结果。