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肿瘤坏死因子家族分子LIGHT表达在T细胞、粒细胞、单核细胞和树突状细胞的膜表面,是一种II型跨膜蛋白,参与体内天然免疫和适应性免疫应答。现在研究表明LIGHT在非酒精性脂肪肝、自身免疫性肝炎和哮喘等疾病中,能作为促炎细胞因子发挥关键作用。但是LIGHT在TLR3诱导的肝损伤中的作用及其分子机制目前尚不清楚。肝脏中的天然免疫细胞表达的TLR3能通过识别肝炎病毒基因组中或体内损伤组织产生的dsRNA,诱导肝损伤。本实验通过poly (I:C)/D-GalN联合注射,建立活化TLR3诱导的小鼠急性肝损伤模型,研究LIGHT在TLR3诱导的肝损伤中的潜在作用,并探讨LIGHT被增强表达和参与诱导肝损伤过程的分子机制。主要研究结果如下：1.在TLR3诱导的小鼠急性肝损伤模型中,LIGHT的表达水平显著上调：通过poly (I:C)/D-GalN联合注射诱导小鼠急性肝损伤,在8、16、24小时检测小鼠血清中ALT的水平,结果表明ALT的水平相对于空白对照组显著上调。模型组小鼠肝脏组织通过苏木精和伊红染色(HE)观察,发现组织损伤严重。通过Real-Time PCR和Western Blot检测,发现在模型组中LIGHT的mRNA表达水平和蛋白表达水平相对于空白对照组出现明显的上调。这表明在TLR3诱导的肝损伤中LIGHT被诱导增强表达。2.构建HVEM原核表达载体并表达纯化HVEM蛋白：选择LIGHT的特异性受体HVEM做为阻断LIGHT功能的蛋白。以PBMC细胞的cDNA为模板克隆,得到人的HVEM基因CDS区的胞外段序列492bp,构建pET-28a-HVEM表达载体。表达载体转化大肠杆菌表达菌株BL21,IPTG诱导表达。HVEM目的蛋白具有164个氨基酸序列,分子量大小为17kD,并且C端被加上His标签。通过NI-NTA纯化后,经考马斯亮蓝染色和Western Blot鉴定确定得到分子量大小正确和没有杂蛋白的HVEM蛋白。3.HVEM阻断LIGHT的功能能显著减缓活化TLR3诱导的肝损伤：(1)通过联合注射致死剂量的poly(I:C)和D-GalN诱导小鼠肝损伤死亡,模型组小鼠在给药16h后全部死亡。但是通过提前1小时注射HVEM蛋白阻断LIGHT的治疗组小鼠中,存活率显著提高。(2)在注射非致死剂量的poly(I:C)后,HVEM蛋白治疗组相对于模型组,血清中肝功能指标ALT的水平在16和24小时显著下调。同时空白对照组和蛋白给药对照组,ALT无明显差异。同时在HE染色观察中,治疗组相对于模型组,肝脏组织损伤显著减轻。而通过TUNEL对肝脏组织切片染色观察,也表明治疗组相对于模型组,肝脏细胞的凋亡也明显减少。说明LIGHT在活化TLR3诱导的小鼠急性肝损伤的致病过程中具有重要作用。4.TLR3胞内的信号通路NF-κB对于活化TLR3诱导的小鼠肝损伤具有关键作用：通过提前1小时分别注射JNK和IκBα的抑制剂给小鼠,选择性的抑制TLR3诱导的胞内信号通路MAPK、JNK和NF-κB的活化。p38、JNK和IκBα的抑制剂分别单独注射组相对于空白对照组,血清中ALT的水平无明显差异,表明药物本身对于小鼠没有毒性作用。然而p38、JNK分别选择性的抑制MAPK、JNK后,对于TLR3诱导的肝损伤造成的血清中ALT水平的上调并没有明显的影响。但是当抑制NF-κB的活化后,能够明显的降低血清中ALT的水平。表明在TLR3的胞内信号中,NF-κB调节的促炎细胞因子的表达在TLR3诱导的肝损伤中具有关键作用。从而,TLR3可能是通过NF-κB诱导LIGHT的增强表达。5.TLR3通过胞内信号通路NF-κB诱导LIGHT的增强表达：使用IκBα的抑制剂提前注射小鼠选择性的抑制NF-κB的活化。通过Real-Time PCR检测肝脏中LIGHT的表达变化发现,相对于模型组阻断TLR3诱导的胞内信号通路NF-κB的活化,能够显著抑制TLR3诱导的LIGHT mRNA水平的上调。