目的: 探讨乙肝病毒X蛋白能否激活MLK3-MKK7-JNK信号模块，从而活化Fas/FasL死亡受体信号通路诱导HepG2细胞的凋亡。　　 方法: 采用分子生物学的方法构建靶向HBX的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX，通过双酶切鉴定后，选出阳性克隆进行DNA测序。脂质体转染法将HBx的表达载体pcDNA3.1-X转染入HepG2细胞建立HBX的高表达模型（pcDNA3.1-X组），将pSilencer3.1-shHBX与pcDNA3.1-X按3：1共转染入HepG2细胞建立干扰HBX表达的细胞模型（RNAi组），同时设立只转染pcDNA3.1空载质粒的HepG2细胞对照（HepG2组）和以通用阴性对照质粒代替pSilencer3.1-shHBX的阴性对照（阴性对照组）。转染72小时后，分别以RT-PCR、Western blot和细胞免疫荧光技术检测HBX的表达量。流式细胞仪、Tunel染色和Hochest33258染色检测细胞的凋亡情况。同时采用Western blot和免疫细胞化学检测MLK3-MKK7-JNK信号模块及Fas-L, Bax，p-Bcl-2蛋白的表达情况，分光光度法检测caspase3，caspase8的活性。　　 结果:　　 1、重组干扰质粒即表达载体pSilencer3.1-shHBX测序鉴定结果与质粒的设计序列一致。　　 2、与HepG2细胞组相比，在pcDNA3.1-X 转染组和阴性对照组中，Western blot检测显示MLK3、MKK7、JNKs磷酸化水平明显增加（P<0.05），Fas-L蛋白相对表达量亦增加（P<0.05）；而在RNAi模型中上述蛋白指标均降低，与pcDNA3.1-X 转染组和阴性对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。　　 3、分光光度法检测结果显示，与HepG2细胞组相比，在pcDNA3.1-X 转染组和阴性对照组中， caspase8 ， caspase3 酶活性增强（ P<0.05 ）；而在RNAi 模型中，caspase8，caspase3酶活性减弱，且与pcDNA3.1-X 转染组和阴性对照相比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。　　 4、经流式细胞术等方法检测结果显示HepG2细胞凋亡率在pcDNA3.1-X 转染组中较HepG2细胞组显著增加（P<0.05）；而在RNAi模型中，细胞凋亡率下降，且与pcDNA3.1-X 转染组和阴性对照组相比较，差异有统计学意义（P<0.05）。　　 结论:　　 1、成功构建了靶向HBX的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX；　　 2、HBx蛋白可以作为应激原激活MLK3-MKK7-JNK信号模块而活化死亡受体通路诱导HepG2细胞的凋亡。