【摘 要】
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[目的]在大肠杆菌中克隆和表达胸腺肤β4(thymosin β4,Tβ4)基因,并进行分离纯化及免疫活性测定.[方法]将基因序列拆分成10个互补的小片段,互为模板,采用PCR两步法扩增得到T
【机 构】
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西北农林科技大学动物医学院,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
【出 处】
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西北农林科技大学学报（自然科学版）
论文部分内容阅读
[目的]在大肠杆菌中克隆和表达胸腺肤β4(thymosin β4,Tβ4)基因,并进行分离纯化及免疫活性测定.[方法]将基因序列拆分成10个互补的小片段,互为模板,采用PCR两步法扩增得到Tβ4基因.将Tβ4基因片段克隆至pTXB1载体的Nde Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点之间,将重组质粒转化至E.coli BL21 eodon plus,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达、几丁质(Chitin beads)亲和层析柱纯化Tβ4.然后用MTT法测定Tβ4的免疫活性.[结果]经测序表明获得了序列正确的人胸腺肽β4基因,构建重组质粒pTXB1-Tβ4,经SDS-PAGE电泳分析表明,重组质粒pTXB1-Tβ4在E.coli BL21 codon plus中高效表达,表达量为30%.将表达产物用几丁质亲和层析柱纯化,获得较纯的Tβ4.MTT检测表明,Tβ4有促进淋巴细胞增殖的活性,最适刺激质量浓度为1.6μg/mL.[结论]获得高效表达的、高纯度的、有生物活性的重组Tβ4,它可促进淋巴细胞的分化、增殖,具有免疫活性,最适刺激质量浓度为1.6 μg/mL.
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