苜蓿盲蝽气味结合蛋白AlinOBP3的克隆、表达及结合特性分析

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有证据表明,气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫的嗅觉识别中是必需的,起着运输外界脂溶性气味分子通过嗅觉感器淋巴液到达嗅觉受体(olfactory receptors,ORs)的关键作用.克隆和表达了一个新的苜蓿盲蝽气味结合蛋白(AlinOBP3),采用qPCR方法解析了AlinOBP3的表达谱,结果表明,AlinOBP3绝大部分在触角中表达.使用1-NPN作为荧光探针,用荧光竞争结合实验研究了AlinOBP3蛋白和9种棉花挥发物及5种性信息素类似物的结合能力.结果表明,在9种棉花挥发物中,月桂烯、β-罗勒烯、α-水芹烯能够与AlinOBP3相结合,其中α-水芹烯和AlinOBP3的结合能力较强,结合常数为56.68μmol/L.在5种性信息素类似物中,丁酸己酯和AlinOBP3的结合能力最强,结合常数为59.53μmol/L.丁酸丁酯、丁酸反-2-己烯酯、丁酸乙酯和AlinOBP3的结合能力中等,结合常数分别为227.39,108.77及143.47μmol/L.据此推测,AlinOBP3可能是性信息素结合蛋白(pheromone binding protein,PBP)并在感受性信息素和植物挥发物的过程中起着双重作用. There is evidence that odorant binding proteins (OBPs) are essential for insect olfactory recognition and play a key role in transport of fat-soluble odor molecules to the olfactory receptors (ORs) through the olfactory sensor lymph (AlinOBP3) was cloned and expressed, and the expression profile of AlinOBP3 was analyzed by qPCR.The results showed that most of AlinOBP3 was expressed in antennae.Using 1-NPN as a fluorescent probe, The binding ability of AlinOBP3 protein to nine kinds of cotton volatiles and five sex pheromone analogs was studied by fluorescence competition experiments.The results showed that among nine kinds of cotton volatiles, myrcene, β-ocimene, α-parsley Alkene could combine with AlinOBP3, in which α-phellandrene had stronger binding ability with AlinOBP3 and the binding constant was 56.68μmol / L. Of the five pheromone analogues, hexyl butyrate had the highest binding ability with AlinOBP3 , And the binding constant was 59.53μmol / L. The binding capacity of butyl butyrate, trans-2-hexenoate butyrate, ethyl butyrate and AlinOBP3 were medium and the binding constants were 227.39,108.77 and 143.47μmol / L respectively Speculated that AlinOBP3 may be Pheromone Binding Protein (pheromone binding protein, PBP) and plays a dual role in susceptibility and pheromone of plant volatiles.
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