探讨抑癌基因p14ARF增强骨肉瘤U2OS细胞对顺铂的敏感性及其作用机制。
方法使用顺铂处理不表达p14ARF的U2OS细胞和稳定表达p14ARF的U2OS–ARF细胞，采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞毒作用和半数抑制浓度值；流式细胞术和Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡；免疫印迹法检测p53以及其下游基因Bax、p21、Mdm2、Fas的表达；比色法检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(caspase)–3、caspase–8、caspase–9蛋白酶的活性。
结果顺铂处理72 h后，U2OS、U2OS–vec和U2OS–ARF组的细胞活力分别为(84.8%±4.4%)、(86.9%±5.0%)和(66.7%±4.6%)，相比U2OS–ARF的细胞活力明显降低，U2OS、U2OS–vec和U2OS–ARF组的IC50分别为(15.8±0.9)、(16.3±0.6) μmol/L和(8.9±0.8) μmol/L，相比U2OS–ARF的IC50明显降低(P<0.05)。流式细胞术和形态学鉴定表明相对于U2OS和U2OS–vec细胞，U2OS–ARF细胞表现更为明显的凋亡比例和凋亡特异性形态学变化。在U2OS–ARF细胞中，p53、Mdm2和p21的基础表达水平稍稍高于U2OS–vec对照细胞，顺铂处理在U2OS–vec和U2OS–ARF细胞均明显激活p53、Mdm2和p21的表达，但在U2OS–ARF细胞中更加明显；另外，顺铂处理对U2OS–vec细胞中Bax和Fas的表达没有影响，却在U2OS–ARF细胞中明显增强了Bax的表达，但对Fas无影响。p14ARF还增强顺铂对caspase–9和caspase–3的活化。
结论p14ARF通过p53凋亡通路增强骨肉瘤U2OS细胞对顺铂的敏感性，并与内源性线粒体通路有关。