【摘 要】
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为了制备犬瘟热病毒（CDV）核衣壳蛋白（NP）的单克隆抗体，从而为建立CDV的诊断方法提供有效试剂。将纯化后的CDV核蛋白作为免疫原注射至BALB/c小鼠腹腔中，取经4次长程免疫和1次加强免疫并达到融合标准的小鼠脾脏刮制成悬液，与小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合制备杂交瘤细胞，利用间接ELISA筛选，并对单抗进行生物特性鉴定。结果表明：经过筛选后共获得2株可持续分泌抗CDV NP的单克隆细胞株
【基金项目】
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重庆市技术创新与应用示范专项项目（cstc2018jscxmszdX0049）； 重庆市巴南区科技计划项目（2020TJZ008）； 重庆理工大学研究生创新基金项目（lgycx 20202128）； 大学生创新创业训练计划项目（2021CX146;2021CX147;2021CX148
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为了制备犬瘟热病毒（CDV）核衣壳蛋白（NP）的单克隆抗体，从而为建立CDV的诊断方法提供有效试剂。将纯化后的CDV核蛋白作为免疫原注射至BALB/c小鼠腹腔中，取经4次长程免疫和1次加强免疫并达到融合标准的小鼠脾脏刮制成悬液，与小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合制备杂交瘤细胞，利用间接ELISA筛选，并对单抗进行生物特性鉴定。结果表明：经过筛选后共获得2株可持续分泌抗CDV NP的单克隆细胞株，以3-3G、1-10B命名。2株细胞株抗体经效价测定均可达到1∶2 048 000;经亚型鉴定，2株杂交瘤细胞均为IgG2型；经过protein A柱纯化，抗体纯度达到了90%以上；BCA法测得抗体浓度至少达2.78 mg/mL;通过Western blot鉴定，制备所得CDV NP单克隆抗体与纯化的CDV NP抗原在预期的60 kd处有蛋白免疫印迹条带。该研究制备的单克隆抗体为后续犬瘟热的检测方法的研究奠定了基础。
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