【摘 要】
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目的 蛋白转导结构域(TAT)介导HBV聚合酶末端蛋白(TP)重链可变区(VH)抗体,研究特异性TAT-VH抗体体外对HBV复制的影响.方法 将TAT-VH基因克隆入原核表达载体pET28a(+),在大肠
【机 构】
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长治医学院附属和平医院感染科,第三军医大学西南医院感染科
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目的 蛋白转导结构域(TAT)介导HBV聚合酶末端蛋白(TP)重链可变区(VH)抗体,研究特异性TAT-VH抗体体外对HBV复制的影响.方法 将TAT-VH基因克隆入原核表达载体pET28a(+),在大肠埃希菌BL21(DE3)LysS内诱导融合蛋白表达并进行纯化.纯化的TAT-VH加入培养的HepG2.2.15细胞,间接免疫荧光法检测其导入HepG2.2.15细胞的效率,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对细胞生长代谢的影响,将TAT-VH加入培养的HepG2.2.15细胞,定量PCR法检测HBV DNA水平.数据行单因素方差分析和t检验.结果 成功制备了TAT-VH融合蛋白,间接免疫荧光及MTT证实TAT-VH可以跨膜导入HepG2.2.15细胞,且对细胞生长无影响;加入5 000 nmol/L TAT-VH的HepG2.2.15细胞培养上清液内HBV DNA为(1.211±0.132)lg拷贝/mL,对照组为(5.325±0.041)lg拷贝/mL(t=72.91,P＜0.05);细胞内分别为(3.521±0.411)和(8.532±0.132)Ig拷贝/mL(t=28.41,P＜0.05).结论 HBV聚合酶TP区特异性TAT-VH抗体在体外可抑制HBV复制,为应用细胞内抗体治疗HBV感染提供了良好的实验基础.
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