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中图分类号：S855 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2014）02-0005-02
美国首次发生猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea，PED）是在2013年。因会引起断奶前仔猪的高死亡率，此病正给猪场带来惨重的经济损失。俄克拉荷马州锅柄状地区的许多猪场在短时间内感染了PED，且常见的传染源不详，怀疑经空气（悬浮尘粒）传播。众所周知，与PEDv相似的冠状病毒在干燥环境中相对稳定，且此类环境还可增加其通过空气传播的可能性。所以，有必要确定是否可在空气样本中检测到PEDv。
1 试验材料和方法
用大容量空气采样器采集空气样本（Midwest Micro-Tek，美国Brookings公司）（图1）。开始时在每个取样点将11 mL运输培养基（MEM，anti-anti，牛血清蛋白、胰蛋白、庆大霉素）放在贮存器中，然后让空气取样器运行30 min。在距发生PED疫情的猪场不同距离的地方采集空气样本。剩余的运送培养基注入15 mL离心管中，在递交至明尼苏达大学兽医诊断实验室用PCR方法检测PED病毒前一直置于干冰中保存。取样后的残留物用蒸馏水冲洗。采样器所有表面和内部充分地喷洒70 %的乙醇溶液进行消毒，设备消毒后在每次采样间需放置30 min以上。再次采样前，消毒剂残留液用蒸馏水冲洗干净，并用纸巾擦干。采样器的储存器和纺纱装置用无菌棉拭（液体Stuart媒介）进行采样，随后用PCR方法检测PEDv。从发病猪场顺风方向的最远点开始，连续采集样本。
PCR阳性空气样本进行生物学鉴定，以确定采集到的病毒颗粒活力。为提高检测的敏感性，我们用10日龄仔猪（图2）进行测定。选取9份PCR阳性样本，进行生物学鉴定，以代表距检测到多个阳性样本[（18.288 m（60 ft），1.609 344 km（1 mi），4.828 032 km（3 mi）]的猪场外的不同距离。尽管在距离猪场 16.09 344 km（10 mi）处采集的样本只有一个阳性样本，但选取第10份PCR阳性样本仍具有重要意义。15头猪分别放入13个独立的房间中，并接种病毒。我们加入1份阳性对照样本（Ct 16）、1份稀释的阳性对照样本（估测的Ct 36-38，在检测时呈阴性）和1份阴性对照样本。所有试验仔猪在接种48 h后进行安乐死，其组织用PCR方法检测PEDv。
2 实验结果
在采用机械通风的母猪场和自然通风的肥育猪场外的多个空气样本中，用PCR方法检测到了PEDv。在距已知阳性猪场外顺风方向9.144 m（30 ft）、18.288 m（60 ft）、91.44 m（300 ft）、0.402 336 km（0.25 mi）、0.804 672 km（0.5 mi）、1.609 344 km （1 mi）、3.218 688 km（2 mi）、4.828 032 km（3 mi）、8.04672（5 mi）、16.09 344 km （10 mi）和24.14 016 km（15 mi）处，共采集64份样本，经PCR检测其中11份样本呈阳性。各距离处检测到的阳性样本数分别为18.288 m（60 ft）（3/6）、0.804 672 km（0.5 ft）（1/5）、1.609 344 km（1 mi）（3/13）、4.828 032 km（3 mi）（3/7）和16.09 344 km（10 mi）（1/3）；未检测到阳性样本的地方分别距猪场9.144 m（30 ft）（0/1）、91.44 m（300 ft）（0/6）、0.402 336 km（0.25 mi）（0/5）、3.218 688 km（2 mi）（0/4）、8.04 672（5 mi）（0/8）和24.14 016 km（15 mi）（0/4）（图3）。
唯一出现腹泻症状的猪为接种低水平Ct的阳性对照样本的猪。肠道样本经PCR检测呈阳性。所有其他猪临床和PCR检测均呈阴性。
3 结论与论述
PEDv可以在远离猪场16.09 344 km （10 mi）外的空气中检测出。空气样本的生物学鉴定结果呈阴性说明：
● 本研究中较低的病毒浓度可能低于10日龄仔猪的最小感染剂量。
● PCR阳性空气样本中无活病毒。
● 接种低浓度病毒的仔猪可能需要待48 h以上供病毒复制，以便用生物学鉴定法进行检测。□□
原题名：Detection of Porcine Epidemic Diarrhea virus in air samples at varying distances to epidemic farms in Oklahoma（英文）
原作者：Dane Goede、R. Robbins、L. Dufresne、M. Engle、A. Rovira、Robert Morrison
美国首次发生猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea，PED）是在2013年。因会引起断奶前仔猪的高死亡率，此病正给猪场带来惨重的经济损失。俄克拉荷马州锅柄状地区的许多猪场在短时间内感染了PED，且常见的传染源不详，怀疑经空气（悬浮尘粒）传播。众所周知，与PEDv相似的冠状病毒在干燥环境中相对稳定，且此类环境还可增加其通过空气传播的可能性。所以，有必要确定是否可在空气样本中检测到PEDv。
1 试验材料和方法
用大容量空气采样器采集空气样本（Midwest Micro-Tek，美国Brookings公司）（图1）。开始时在每个取样点将11 mL运输培养基（MEM，anti-anti，牛血清蛋白、胰蛋白、庆大霉素）放在贮存器中，然后让空气取样器运行30 min。在距发生PED疫情的猪场不同距离的地方采集空气样本。剩余的运送培养基注入15 mL离心管中，在递交至明尼苏达大学兽医诊断实验室用PCR方法检测PED病毒前一直置于干冰中保存。取样后的残留物用蒸馏水冲洗。采样器所有表面和内部充分地喷洒70 %的乙醇溶液进行消毒，设备消毒后在每次采样间需放置30 min以上。再次采样前，消毒剂残留液用蒸馏水冲洗干净，并用纸巾擦干。采样器的储存器和纺纱装置用无菌棉拭（液体Stuart媒介）进行采样，随后用PCR方法检测PEDv。从发病猪场顺风方向的最远点开始，连续采集样本。
PCR阳性空气样本进行生物学鉴定，以确定采集到的病毒颗粒活力。为提高检测的敏感性，我们用10日龄仔猪（图2）进行测定。选取9份PCR阳性样本，进行生物学鉴定，以代表距检测到多个阳性样本[（18.288 m（60 ft），1.609 344 km（1 mi），4.828 032 km（3 mi）]的猪场外的不同距离。尽管在距离猪场 16.09 344 km（10 mi）处采集的样本只有一个阳性样本，但选取第10份PCR阳性样本仍具有重要意义。15头猪分别放入13个独立的房间中，并接种病毒。我们加入1份阳性对照样本（Ct 16）、1份稀释的阳性对照样本（估测的Ct 36-38，在检测时呈阴性）和1份阴性对照样本。所有试验仔猪在接种48 h后进行安乐死，其组织用PCR方法检测PEDv。
2 实验结果
在采用机械通风的母猪场和自然通风的肥育猪场外的多个空气样本中，用PCR方法检测到了PEDv。在距已知阳性猪场外顺风方向9.144 m（30 ft）、18.288 m（60 ft）、91.44 m（300 ft）、0.402 336 km（0.25 mi）、0.804 672 km（0.5 mi）、1.609 344 km （1 mi）、3.218 688 km（2 mi）、4.828 032 km（3 mi）、8.04672（5 mi）、16.09 344 km （10 mi）和24.14 016 km（15 mi）处，共采集64份样本，经PCR检测其中11份样本呈阳性。各距离处检测到的阳性样本数分别为18.288 m（60 ft）（3/6）、0.804 672 km（0.5 ft）（1/5）、1.609 344 km（1 mi）（3/13）、4.828 032 km（3 mi）（3/7）和16.09 344 km（10 mi）（1/3）；未检测到阳性样本的地方分别距猪场9.144 m（30 ft）（0/1）、91.44 m（300 ft）（0/6）、0.402 336 km（0.25 mi）（0/5）、3.218 688 km（2 mi）（0/4）、8.04 672（5 mi）（0/8）和24.14 016 km（15 mi）（0/4）（图3）。
唯一出现腹泻症状的猪为接种低水平Ct的阳性对照样本的猪。肠道样本经PCR检测呈阳性。所有其他猪临床和PCR检测均呈阴性。
3 结论与论述
PEDv可以在远离猪场16.09 344 km （10 mi）外的空气中检测出。空气样本的生物学鉴定结果呈阴性说明：
● 本研究中较低的病毒浓度可能低于10日龄仔猪的最小感染剂量。
● PCR阳性空气样本中无活病毒。
● 接种低浓度病毒的仔猪可能需要待48 h以上供病毒复制，以便用生物学鉴定法进行检测。□□
原题名：Detection of Porcine Epidemic Diarrhea virus in air samples at varying distances to epidemic farms in Oklahoma（英文）
原作者：Dane Goede、R. Robbins、L. Dufresne、M. Engle、A. Rovira、Robert Morrison