【摘 要】
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目的探讨微小RNA-144(miR-144)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及相关蛋白影响。方法运用脂质体转染的方法,在骨肉瘤细胞株MG-63中转染不同浓度miR-144类似物(miR-144组),随机miR-144
【机 构】
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浙江省安吉县人民医院骨科,浙江大学医学院附属第二医院
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目的探讨微小RNA-144(miR-144)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及相关蛋白影响。方法运用脂质体转染的方法,在骨肉瘤细胞株MG-63中转染不同浓度miR-144类似物(miR-144组),随机miR-144片段作为阴性对照组。实时定量PCR检测miR-144表达水平。DAPI染色观察miR-144对细胞形态的影响,用MTT检测细胞增殖,Annexin/PI双染确定细胞凋亡比例。免疫印迹检测PTEN以及Rb等抑癌基因编码蛋白和凋亡相关蛋白表达情况。结果实时定量PCR结果显示,miR-144组miR-144的表达(1128.54±738.52)明显高于空白对照组(1.00±0.00)和阴性对照组(2.06±0.73)(P<0.01)。与阴性对照组和空白对照组比较,miR-144组细胞数量明显减少,增殖受抑制,流式细胞检测显示,细胞凋亡率明显增加。免疫印迹检测显示,Rb和PTEN表达水平有所增加,而凋亡相关的Caspase-3活化,线粒体膜上Cyto C释放。而阴性对照组与空白对照组以上数值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论合成的miR-144片段(miR-144 mimic)能顺利进入细胞并上调miR-144的表达,对骨肉瘤细胞都有一定程度的抑制作用,并有浓度依赖性,对MG-63的抑制效果最强,并通过活化Caspase-3促进凋亡,上调PTEN和Rb的表达实现对细胞的抑制作用。未来可以基于miR-144进行骨肉瘤治疗的短核苷酸类药物开发。
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