【摘 要】
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目的分析恒河猴ACE2(rh-ACE2)及人ACE2(hu-ACE2)基因变异与病毒进入之间的关系。方法本次研究中我们以肺部病理变化为基础,选取6只轻度、6只重度SARS恒河猴及2只正常对照恒河
【机 构】
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中国医学科学院&北京协和医学院比较医学中心病理室; 香港大学艾滋病研究所;
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目的分析恒河猴ACE2(rh-ACE2)及人ACE2(hu-ACE2)基因变异与病毒进入之间的关系。方法本次研究中我们以肺部病理变化为基础,选取6只轻度、6只重度SARS恒河猴及2只正常对照恒河猴作为研究对象。轻度肺损伤的病理特征为肺间隔增宽伴单核巨噬细胞浸润;重度肺损伤以弥漫性肺泡损伤为其特征,主要病理特征为弥漫性肺间隔增宽伴单核巨噬细胞浸润、局部肺间隔融合、肺泡腔内可见蛋白水肿液及纤维素渗出。运用RT-PCR从这些恒河猴肾组织中扩增出全长rh-ACE2基因,克隆并分析其变异规律。每只恒河猴选取2个代表性质粒转染HEK293T细胞后,观察基因表达水平及病毒进入效率的变化。结果序列分析结果提示,在14只恒河猴中,我们共检测到55个随机非同义突变。以序列相对保守的8号恒河猴的8-2克隆为rh-ACE2的代表性序列,与hu-ACE2序列相比我们在8-2克隆的rh-ACE2序列中共查及38个一致性非同义突变。Western blot和免疫荧光的结果显示11号恒河猴11-7克隆的ACE2表达水平较11-1克隆明显降低。病毒进入分析结果显示11号恒河猴11-7克隆转染细胞后其病毒的进入效率较11-1克隆明显降低。序列分析结果提示,与11-1克隆相比,11-7克隆出现R192G、Y217N两个位点突变。定点突变分析显示:Y217N突变是引起rh-ACE2基因11-7克隆蛋白表达和病毒进入降低的关键性氨基酸位点。我们突变hu-ACE2基因获得hu-ACE2(Y217N)突变型质粒,转染细胞后发现hu-ACE2(Y217N)基因的表达水平和病毒进入效率较hu-ACE2基因明显下降。结论实验结果初步提示中国恒河猴不同个体间rh-ACE2基因氨基酸序列存在明显变异;Y217N突变可明显降低rh-ACE2和hu-ACE2的蛋白表达和SARS假病毒的进入;该研究将为设计针对ACE2的靶向药物及进一步理解ACE2在SARS发病中的作用提供一些线索。
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