【摘 要】
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目的:基于α7n Ach R介导的胆碱能抗炎通路探讨右美托咪定对脓毒症相关膈肌功能损伤的作用及机制。方法:1、选择SPF级6-8周C57BL/6雄性小鼠30只,腹腔注射LPS建立脓毒症模型。观察小鼠的行为学改变,于造模后0 h、8 h、16 h、24 h和32 h取材并评估膈肌损伤程度。2、选取SPF级6-8周C57BL/6雄性小鼠50只,随机分为5组（n=10）,对照组（SHAM组）、脓毒症组（
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目的:基于α7n Ach R介导的胆碱能抗炎通路探讨右美托咪定对脓毒症相关膈肌功能损伤的作用及机制。方法:1、选择SPF级6-8周C57BL/6雄性小鼠30只,腹腔注射LPS建立脓毒症模型。观察小鼠的行为学改变,于造模后0 h、8 h、16 h、24 h和32 h取材并评估膈肌损伤程度。2、选取SPF级6-8周C57BL/6雄性小鼠50只,随机分为5组（n=10）,对照组（SHAM组）、脓毒症组（LPS组）、脓毒症+右美托咪定组（LPS+DEX组）、脓毒症+α银环蛇毒组（LPS+BT组）、脓毒症+右美托咪定+α银环蛇毒组（LPS+DEX+BT组）。给药方式如下:BT（1ug/kg）在LPS注射术前1小时完成腹腔注射;LPS（10mg/kg）腹腔注射;DEX（40ug/kg）在LPS注射术后30分钟完成腹腔注射;SHAM组应按照相应的时间节点完成等量生理盐水腹腔注射。各组小鼠于LPS注射后24h留取血清及膈肌组织标本,光学显微镜下观察膈肌组织的病理学改变;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠膈肌及血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、LDH的浓度水平;q RT-PCR检测膈肌组织中TNF-α、IL-6、IL-1β的m RNA的相对表达量;Western blot法测定膈肌组织GSDMD、Caspase1、Cleaved-IL-1β、a7n ACh R的蛋白表达。结果:1、HE:LPS术后0h、8h、16h、24h和32h检测病理切片,结果显示在24h时小鼠的膈肌损伤程度最严重;与LPS组比较,LPS+DEX组膈肌损伤明显减轻,而LPS+BT组和LPS+DEX+BT组膈肌损伤则明显加重,后两组损伤程度无明显差异。2、ELISA:与SHAM组比较,LPS组TNF-α、IL-6、IL-1β、LDH含量明显增高（P<0.05）;与LPS组比较,LPS+DEX组TNF-α、IL-6、IL-1β、LDH含量明显下降（P<0.05）;与LPS组比较,LPS+BT组和LPS+DEX+BT组TNF-α、IL-6、IL-1β、LDH含量明显增高（P<0.05）,而后两组之间比较无统计学意义（P>0.05）。3、PCR:与SHAM组比较,LPS组TNF-α、IL-6、IL-1β的m RNA的相对表达量均明显上调（P<0.05）;而与LPS组比较,LPS+DEX组TNF-α、IL-6、IL-1β的m RNA的相对表达量明显下调（P<0.05）;与LPS组比较,LPS+BT组和LPS+DEX+BT组TNF-α、IL-6、IL-1β的m RNA的相对表达量上调（P<0.05）,而后两组之间比较无统计学意义（P>0.05）。4、WB:与SHAM组比较,LPS组GSDMD、Caspase1、Cleaved-IL-1β的相对表达量明显上调（P<0.05）;而与LPS组比较,LPS+DEX组GSDMD、Caspase1、Cleaved-IL-1β的相对表达量明显下调（P<0.05）;与LPS组比较,LPS+BT组和LPS+DEX+BT组GSDMD、Caspase1、Cleaved-IL-1β相对表达量明显上调（P<0.05）,而后两组之间比较无统计学意义（P>0.05）。a7n ACh R的相对表达量与上述结果正好相反。结论:1、脓毒症相关膈肌功能损伤发生发展过程中存在细胞焦亡。2、α2肾上腺素能受体激动剂右美托咪定可能通过激活α7n ACh R调控胆碱能抗炎通路活性来减轻细胞焦亡,进而改善脓毒症相关膈肌功能损伤。
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