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澳洲坚果又名夏威夷果、澳洲胡桃,是一种新兴的热带、亚热带果树,具有很高的经济价值。在20世纪70年代引种到中国南方,我国主要的种植区域是云南和广西,近年来,澳洲坚果在广东的种植面积不断扩大,成为新兴产区。据报道,危害澳洲坚果的主要病害有10多种,其中,真菌病害最为突显。为了明确我国澳洲坚果真菌病害及其病原种类,从主产区云南和新兴产区广东,共8200亩(6个基地)的澳洲坚果园随机采集样品,采用组织分离法分离病原物,运用柯赫法则验证其致病性,并用形态学和分子生物学相结合的方法鉴定病原菌。并对澳洲坚果叶斑病的两种新病原进行生物学特性分析。主要研究结果如下: 1. 澳洲坚果叶部病害采集及病原鉴定 在2017年的3月至10月间,对广东和云南共6个基地的澳洲坚果叶部病害进行采集。共分离到真菌458株,其中致病菌247株。在广东种植区分离到病原菌143株,共分为6个分类单元(每个分类单元为一个属)分别为共有18种病原菌。云南地区致病真菌104株,共分为8个分类单元,分为11种病原菌。 2. 澳洲坚果叶斑病的两种新致病菌 (1)在郁南县发现一种澳洲坚果叶部病害。初发生时,叶片上形成黄褐色圆斑,圆斑中间颜色较深,边缘浅,后来病斑变大且产生白色絮状物。菌落在PDA培养基上呈白色,并霉状小黑点,为分生孢子堆。分生孢子纺锤形,约21.25~27.52μm×5.25~7.34μm,两端细胞透明无色,一端细胞为三角形,另一端为钝圆形。孢子顶端有2~4根附属丝,长10.25~22.72μm。基部细胞长2.31~4.75μm。该菌的ITS与Pestalotiopsis microspora的相似性达到99%以上。根据形态学特征和分子鉴定结果,将病原菌鉴定为小孢拟盘多毛孢(P. microspora)。P. microspora在PDA培养基上生长最好,培养4 d菌落直径为62.9 mm;最适合菌丝生长的碳源为葡萄糖;最佳氮源为硫酸铵,在氮源为尿素时不生长;28℃时菌落直径最大,35℃时病原菌不能生长;病原菌在pH为4~11时均能生长,pH 7生长最好;光照培养有利于菌丝生长;菌丝致死温度为59℃,10 min。 (2)在湛江市麻章区南亚热带作物研究所澳洲坚果园发现一种叶部病害,田间自然状态下,多发生在叶缘。初发生时,形成黄色圆斑,随着发病时间的延长,黄色圆斑逐渐变为深褐色。发病后期,病斑坏死干枯,连成一片。病原菌在PDA培养基中生长速度快,病原菌菌丝浓厚致密,病原菌不易产孢,培养45 d出现少量孢子。分生孢子长梭形至椭圆形,孢子大小为9.25±1.43μm×5.24±0.96μm。该菌的ITS与Neofusicoccum mangiferae的相似性达到99%以上。根据形态学特征和分子鉴定结果,将病原菌鉴定为芒果新壳梭孢菌(N. mangiferae),其在Czapek培养基最有利于病原菌的生长,培养4 d,菌落直径达65.5 mm;适合病原菌生长的最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为硫酸铵;病原菌在15~35℃均能生长,最适生长温度为25℃,40℃病原菌不生长;病原菌在pH范围4~11均可生长,pH 7时生长最佳;黑暗培养有利于病原菌生长;菌丝致死温度为56℃,10 min。 (3)通过广东和云南两省澳洲坚果基地进行病样采集、分离及鉴定,明确了澳洲坚果叶部病害发生的种类。并对两种澳洲坚果叶斑病新病原进行生物学特性测定。为以后探究不同病原及其发病规律,以及有针对性的防治病害打下良好的基础。