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目的 脂联素(Adiponectin,APN)是由脂肪细胞特异性分泌的一种血浆蛋白质,它在血浆中有较高的浓度,约为5～30μg/ml,参加包括饮食摄入、糖代谢、脂类代谢等相关的能量平衡调节,与肥胖,胰岛素抵抗(IR),2型糖型尿病、心血管疾病等有密切的相关性。肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病患者的血浆脂联素水平明显下降。目前国际公认的测定胰岛素抵抗的”金标准”高胰岛素正血糖钳夹实验(hyperinsulinemic-euglycemic clamp)发现,脂联素水平与胰岛素作用的糖代谢呈正相关。脂联素基因在人类染色体上定位于3q27,这一位点恰恰是糖尿病的敏感位点。本研究以HepG2肝细胞为研究对象,用不同浓度的游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)处理肝细胞,运用RT-PCR方法观察肝细胞脂联素受体(R1/R2)的表达,探索脂联素受体是否参与了高FFA诱导的胰岛素抵抗过程。 方法 1.细胞培养与分组 HepG2在含10%小牛血清、100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素的DEME培养液中,置于37℃、5%CO2、饱和温度条件下常规培养48h,置换培养液。并加入浓度分别为100、200和400umol/l的PA;未加脂肪酸的设为对照组,继续培养24h。 2、脂联素受体的RT-PCR (1) 细胞总RNA提取 将细胞加入1mlTrizol混合后,移入新的灭菌Eppendorf管中,室温放置5分钟,加人0.2ml氯仿,颠倒混匀15秒并于室温放置5分钟;4℃、12000g离心15分钟;离心后取液相,移至另一新试管中,以0.5ml异丙醇沉淀RNA,混匀,-20℃放置2小时;4℃、12000g离心10分钟;弃上清,沉淀用