论文部分内容阅读
目的:依据GVHD发生机制构建体外DC诱导T淋巴细胞的调节模型,观察供者未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)刺激白体T细胞增殖的能力,探讨利用imDC治移植物抗宿主病(GVHD)临床应用的可行性。方法:从健康供者外周血分离单核细胞,采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白细胞介素(IL)-4联合培养5天,诱导其分化成imDC;诱导培养7天,加脂多糖(LPS)刺激18小时后,分化成熟树突状细胞(mature dendritic cell,mDC)。并通过倒置显微镜和HE染色观察细胞形态,细胞滴片免疫组化检测mDC表面MHC-II类分子HLA-DR、CD86的表达情况.利用流式细胞仪检测imDC和mDC表面DC特异性分子标记CDla和成熟标记CD83的阳性表达率。采用单向MLR方法,进行供受者混合淋巴细胞培养,构建DC诱导T淋巴细胞的调节模型,将实验设为3组:对照组、imDC组和mDC组,共孵育48小时后,加入CCK-8,用酶标仪检测各组OD值,比较供者imDC和mDC刺激自体T细胞增殖的能力。结果:(1)培养5天后细胞呈半悬浮状生长,周边毛刺较粗短,形态不一,细胞体积较单核细胞增大具有典型的imDC形态学特征,流式细胞仪检测CDla、CD83和双抗分别表达为(67.06±0.93)%、(66.82±5.06)%和(62.34±1.94)%;培养8天后细胞呈单个悬浮状生长,胞体圆形,体积较大,细胞周边可见明显较长突起,具有典型mDC形态学特征,细胞滴片免疫组化结果显示HLA-DR、CD86阳性,流式细胞仪检测CDla、CD83和双抗表达分别为(64.98±2.99)%、(86.44±4.10)%和(65.16±0.55)%。(2)单向MLR法混台淋巴细胞培养共孵育48小时后,加入CCK-8检测OD值,imDC组与对照组比较无统计学意义(P>0.05):mDC组与对照组、imDC组比较均有显著统计学意义(P<0.01),对自体T细胞的刺激指数大于2.00(SI=2.22),与2.00相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:形态学观察、免疫组化及流式细胞仪细胞表型检测结果提示,rhGM-CSF+IL-4联合成功诱导培养出了imDC和mDC;在单向MLR法构建的DC诱导T淋巴细胞的调节模型中CCK-8法检测结果提示imDC可以诱导白体T细胞低应答,有可能成为防治GVHD的一种方法。