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IL-10家族作为细胞因子的重要成员,不仅参与免疫细胞的增殖、分化和激活,还参与炎症和抗炎症反应。本文从日本鳗鲡中克隆出5个IL-10家族成员基因(AjIL-10a、AjIL-10b、AjIL-20、AjIL-22和AjIL-26),分析了这些基因的结构特征,并对其免疫功能和转录调控进行了初步研究,结果如下:1)日本鳗鲡IL-10家族基因结构与哺乳动物同源基因相似,其ORF由5个外显子共同编码,其中AjIL-20和AjIL-22在5‘-UTR中均有1个内含子。该5个家族成员的C-端均具有IL-10家族特征基序。AjIL-20中Cys的个数和相对位置均与哺乳动物一致;AjIL-10a和AjIL-10b除具有哺乳动物的4个Cys外,还具有2个鱼类特有的Cys;AjIL-22的Cys数量与哺乳动物IL-22相同,但是前2个Cys的位置不同;AjIL-26中仅具有2个Cys,而哺乳动物IL-26具有4个。2)采用实时荧光定量方法检测AjIL-10a、AjIL-22和AjIL-26在日本鳗鲡血液、鳃、头肾、肠和脾脏等11(或12)个组织中的表达水平、腹腔注射Poly I:C和迟缓爱德华氏菌后AjIL-10a在鳃、头肾、肠和脾脏中以及AjIL-22和AjIL-26在肠中的表达量变化。结果显示,AjIL-10a、AjIL-22和AjIL-26在日本鳗鲡不同组织中均有表达,AjIL-10a主要在血液、头肾和体肾中表达,AjIL-22和AjIL-26则主要在皮肤和黏膜组织中表达。Poly I:C或迟缓爱德华氏菌刺激后,AjIL-10a在鳃、头肾、肠道以及脾脏中的表达量均有不同程度的上调,AjIL-22和AjIL-26在肠道中的表达量也上调,表明AjIL-10a、AjIL-22和AjIL-26参与日本鳗鲡抗菌和抗病毒的免疫反应。3)克隆了该5个基因的5‘调控序列,预测其均具有Sp1、AP-1、Oct-1、GATA-1、C/EBPβ、NF-κB,和GR(除AjIL-22外)等TFBS,并具有转录阻遏蛋白YY1结合位点;此外,AjIL-10a、AjIL-10b和AjIL-22还具有与IFN诱导相关的转录因子(ISGF-3、ICSBP和IRF-1)。4)构建了上述基因的原核表达重组质粒,并对重组质粒PQE30-AjIL-22和PQE30-AjIL-26进行了诱导表达,经鉴定二者均以包涵体形式表达。此外,本文克隆了2个日本鳗鲡II型IFN基因(AjIFN-γ和AjIFN-γrel)。AjIFN-γ的基因结构为4外显子/3内含子,具有IFN-γ特征基序和NLS(RRRR);AjIFN-γrel的基因结构为3外显子/2内含子,仅部分保守IFN-γ特征基序,不具有NLS。AjIFN-γ主要在肝脏、皮肤和脾脏表达。Poly I:C或迟缓爱德华氏菌刺激均能上调AjIFN-γ的表达量,表明AjIFN-γ参与日本鳗鲡抗菌和抗病毒的免疫过程。采用双荧光素酶报告基因检测系统检测AjIFN-γ的启动子活性,发现AjIFN-γ上游-240/+136区域中含有起始AjIFN-γ转录的关键启动子元件,-1062/-814区域可能存在转录正调控元件,而-1252/-1062区域可能存在负调控元件。