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目的 探究桑黄多糖(polysaccharides of Phllinus igniarius,PPI)对THP-1源性人巨噬细胞和RAW264.7小鼠巨噬细胞TLR4信号通路的激活作用,初步探讨PPI对OVA免疫小鼠的佐剂作用。方法 (1)水提醇沉法提取桑黄多糖,硫酸蒽醌法检测桑黄多糖含量,GPC法测桑黄多糖平均分子量(2)MTS法检测PPI对HEK-BlueTM hTLR4细胞、THP-1细胞及RAW264.7细胞增殖的影响;(3)检测PPI对HEK-BlueTM hTLR4细胞分泌性碱性磷酸酶(SEAP)表达量的影响;(4)ELISA法检测PPI对THP-1细胞TNF-α和IP-10分泌水平及对RAW264.7细胞TNF-α分泌水平的影响;(5)Q-PCR测定PPI对THP-1细胞TLR4通路相关TNF-α、IL-6、IP-10、IFN-β、TLR4、IL-12a和IL-12b mRNA表达水平的影响;(6)Western Blot检测PPI对RAW264.7细胞TLR4通路相关蛋白IRAK1、IRF3、IKKβ、IκBα、NFκB p65、ERK、JNK和p38及其磷酸化的影响;(7)选6周龄雌性C57BL/6小鼠进行OVA免疫,随机分为空白对照组、OVA模型组、PPI高中低剂量组以及铝佐剂阳性对照组。实验步骤为PPI连续4d灌胃给药,末次给药24h后OVA腹股沟皮下注射免疫;14d后进行二次免疫,免疫前连续4d灌胃给药。二免结束后14d,取血清检测OVA特异性抗体IgG水平体外培养脾淋巴细胞并检测在OVA、LPS及ConA诱导下脾淋巴细胞增殖率。结果 (1)粗糖得率为1.84%,多糖含量为62.2%,PPI平均分子量为12668Da(2)PPI在浓度250μg/mL及以下时,对HEK-BlueTM hTLR4细胞系无细胞毒性,316μg/mL及以下时,对THP-1细胞无细胞毒性。在500μg/mL浓度及以下时对RAW264.7细胞无细胞毒性。(3)PPI具有激活HEK-BlueTM hTLR4细胞TLR4信号通路的作用。(4)PPI能够促进THP-1细胞TNF-α和IP-10的分泌水平(p<0.01),对 THP-1 细胞 TLR4 通路相关基因 TNF-α、IL-6、IP-10、IFN-β、TLR4、IL-12a 和IL-12b的mRNA表达有促进作用(p<0.01)(5)PPI能够促进RAW264.7细胞TNF-α的分泌水平(p<0.01),减少IRAK1蛋白表达,促IKKα/β、IKBα、ERK、JNK、p38、IRF3蛋白磷酸化(5)PPI能显著提高OVA免疫小鼠血清抗OVA特异性抗体IgG水平(p<0.01),促进OVA刺激下的淋巴细胞增殖(p<0.01),显著增加LPS诱导的B淋巴细胞增殖(p<0.01),对ConA诱导的T淋巴细胞增殖无显著影响(p>0.05)。结论 PPI能激活THP-1源性人巨噬细胞和RAW264.7小鼠巨噬细胞的TLR4信号通路,对OVA免疫小鼠有免疫佐剂作用。