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本试验利用氯化苄法提取了毕赤酵母GS115、大肠杆菌JM109、无花果曲霉AS3.324和亚心型扁藻的基因组DNA,结果表明提取出的基因组DNA可以用于进一步的基因工程操作,证明氯化苄法是一种普适的基因组DNA提取方法.然后利用氯化苄法从纳豆枯草杆菌(As1.1086)中提取出基因组DNA,PCR扩增出纳豆激酶基因(NK),构建克隆载体,将该基因克隆到克隆载体pMD18-T上,获得重组质粒pMD18-T/NK,其测序结果表明:NK基因由831个核苷酸组成,编码276个氨基酸,其中不含内含子.将pMD18-T/NK以及表达质粒pPIC9K分别用EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切,连接获得重组载体pPIC9K/NK并将其转化至巴斯德毕赤酵母GS115中.纳豆激酶基因组DNA转入毕赤酵母GS115表达后,进行了发酵条件的优化.考察了无机氮源培养基在酵母发酵中的应用,无机氮源选择了(NH<,4>)<,2>SO<,4>和NH<,4>NO<,3>,并与常用的有机氮源培养基进行了对比,确定了优化的培养基组成.实验中发现无机氮源可以作为重组载体毕赤酵母GS115的选择性培养基.在此基础上进行了高密度发酵的试验,结果发现以NH<,4>NO<,3>和(NH<,4>)<,2>SO<,4>为氮源的毕赤酵母的产率分别是有机氮源培养基的产率的90.71％和85.81％.