胸椎黄韧带骨化的血清比较蛋白质组学研究

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研究背景:黄韧带骨化(ossification of ligament flava, OLF)与后纵韧带骨化(ossification of posterior longitudianl ligament, OPLL)均为发生在脊柱韧带的疾病,其病因未明、起病隐匿、病程漫长,主要以韧带出现异位骨化、增厚并压迫脊髓、神经根,引起一系列脊髓损害及神经根刺激症状,严重危害患者健康,是引起颈胸部椎管狭窄、脊髓受压的常见原因。一般认为两者是多因素疾病,其病理变化属于异位骨化,是一种软骨内化骨的过程。目前关于OLF及OPLL的研究绝大多数都是针对该病的治疗,涉及病因学方面的基础研究较少,主要集中在基因学研究上,且研究多为OPLL,关于OLF的研究较少。2D-DIGE是近年来发展成熟的新蛋白质组技术,是目前定量蛋白质组学研究中可信度和准确性最高的技术之一。目前尚无关于OLF的血清蛋白质组学研究报道。对胸椎黄韧带骨化(OLF)进行比较蛋白质组学研究,寻找患者血清的蛋白质差异,有助于从分子水平认识OLF的发生发展机制,也可以为OLF的诊断和防治提供有效的分子标志物。研究目的:1.构建OLF患者与对照间血清差异蛋白质组图谱。2.应用质谱鉴定技术,对差异蛋白质点进行鉴定。3.结合蛋白功能网络研究成果,分析所鉴定的蛋白质在OLF发生发展中的作用。研究方法:1.采集5例胸椎黄韧带骨化(OLF)患者和5例年龄、性别匹配的腰椎间盘突出症患者(不伴有脊柱OLF)的血清。经去高丰度蛋白、CyDye染料交叉标记,然后进行荧光双向差异凝胶电泳、图像扫描,并用DeCyder v.5.02图像分析软件对DIGE图像进行分析和寻找差异点。2.对筛选出的差异点进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,检索IPI-HUMAN数据库鉴定蛋白。研究结果:1.经过荧光双向差异凝胶电泳、DeCyder软件分析发现,胸椎黄韧带骨化(OLF)患者和腰椎间盘突出症患者(不伴有脊柱OLF)血清中有23个蛋白质差异点,两者之间的差异有统计学意义。其中6个点在OLF血清中表达上调,17个点表达下调。2.23个蛋白质差异点经质谱分析,IPI-HUMAN数据库鉴定出10个差异蛋白。结论:1.首次对胸椎OLF患者进行蛋白质组研究,成功构建OLF患者与相匹配腰椎间盘突出症患者(不伴有脊柱OLF)血清差异蛋白质组资料库。2.应用质谱鉴定技术,成功鉴定出10个差异表达蛋白质。这种蛋白质的差异表达究竟是OLF发生的始动因素还是继发改变尚不能明确。其具体意义、具体作用及其是否具有特异性尚需进一步研究以阐明。研究结果为OLF的发病和进展机制研究,筛选可作为OLF诊断标记的血清标志物及药物作用靶点奠定了一定的理论基础。
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