【摘 要】
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目的:原发性胆汁性胆管炎（Primary biliary cholangitis,PBC）是一种由于免疫系统对肝脏胆管上皮细胞（Bile duct epithelial cells,BEC）进行攻击而产生的慢性胆汁淤积性自身免疫性疾病。在PBC患者的血液和肝脏中,NK细胞的数量和比例明显增加。PBC患者的肝脏NK细胞对自身BEC具有较强的细胞毒活性。为此,本研究拟探索NK细胞及其表型在PBC启动及
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目的:原发性胆汁性胆管炎（Primary biliary cholangitis,PBC）是一种由于免疫系统对肝脏胆管上皮细胞（Bile duct epithelial cells,BEC）进行攻击而产生的慢性胆汁淤积性自身免疫性疾病。在PBC患者的血液和肝脏中,NK细胞的数量和比例明显增加。PBC患者的肝脏NK细胞对自身BEC具有较强的细胞毒活性。为此,本研究拟探索NK细胞及其表型在PBC启动及慢性发展阶段所起的作用。方法:本研究采用2-辛炔酸-牛血清白蛋白（2OA-BSA）联合聚肌胞（polyI:C）免疫C57BL/6小鼠建立PBC模型,通过预先或免疫后分别剔除NK细胞,系统深入研究NK细胞及其表型在PBC启动及慢性发展阶段所起的作用。NK细胞的剔除采用NK细胞抑制剂抗As GM1抗体（Anti Asialo GM1）。NK细胞的剔除效果和其在肝脏中的比例及肝脏中CD4+T、CD8+T、CD62L+NK细胞比例采用流式细胞术（FACS）检测。小鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（TBIL）采用全自动生化仪检测,抗线粒体抗体（Anti-mitochondrial antibody,AMA）的滴度及干扰素 γ（Intorferon-γ,IFN-γ）的血清水平变化趋势采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测。利用肝脏常规和免疫病理分析评估肝脏炎症的严重程度。结果:PBC模型组小鼠的ALT含量高于HC组小鼠（98.96±14.90 U/L vs 48.36±0.81U/L,P<0.05）。和HC组小鼠相比,PBC模型组小鼠血清AST含量升高（185.66±50.84U/L vs 87.59±4.21 U/L,P<0.05）,在2OA-BSA免疫前经抗As GM1抗体处理的小鼠AST含量低于PBC模型组小鼠（85.21±5.97 U/L vs 185.66±50.84 U/L,P<0.05）。PBC模型组小鼠的ALP含量高于HC组小鼠（223.04±44.77 U/L vs 106.58±30.17 U/L,P<0.01）,而和PBC模型组相比,经抗As GM1抗体处理后的两组小鼠ALP的含量均下降（223.04±44.77 U/L vs 122.45±30.39 U/L vs 95.73±7.47 U/L,P<0.01）。但在2OA-BSA免疫前剔除NK细胞的小鼠下降程度更明显。和PBC模型组小鼠相比,在2OA-BSA免疫后剔除NK细胞后小鼠TBIL含量下降（17.04±0.77 U/L vs 27.54±5.44U/L,P<0.05）。和PBC模型组小鼠相比,无论是在2OA-BSA免疫前还是免疫后剔除小鼠NK细胞,小鼠血清AMA的滴度均下降（245.71±27.59ug/L vs 328.19±18.40 ug/L vs449.11±26.39 ug/L,P<0.05）。在2OA-BSA免疫之前剔除NK细胞,小鼠血清AMA滴度降低更明显（245.71±27.59 ug/L vs 328.19±18.40ug/L,P<0.05）。在2OA-BSA免疫前或免疫后剔除NK细胞,IFN- γ血清水平的降低在两组间的差别18周之后才明显体现出来（94.93±28.12ug/L vs 188.49±39.94 ug/L,P<0.05）。单因素方差分析的结果显示,PBC组CD4+T细胞比例低于HC组（24.95±3.75%vs 46.33±2.29%,P<0.05）。而无论在2OA-BSA免疫前或免疫后剔除小鼠NK细胞,其肝脏CD4+T细胞比例均高于PBC模型组小鼠（64.14±4.54%vs 48.67±1.93%vs 24.95±3.75%,P<0.01）。PBC模型组小鼠肝脏中CD8+T细胞比例高于其他3组（64.65±1.91%vs 29.97±2.87%vs 28.36±4.58%vs35.67±1.79%,P<0.01）。而就CD4/CD8+T细胞的比值来说,PBC模型组低于HC组、2OA-BSA免疫小鼠前剔除NK细胞组（0.39±0.07 vs 1.60±0.67 vs 2.27±0.43,P<0.05）。另外,和HC组小鼠相较而言,PBC模型鼠肝脏中的CD62L+NK细胞比例增多（55.34±8.34%vs 44.52±5.05%,P<0.01）。但抗ASGM1抗体剔除NK细胞前后小鼠的肝脏组织学无显著差异。结论:1.2OA-BSA联合polyI:C可以成功诱导建立PBC小鼠模型。2.剔除NK细胞可减轻胆汁淤积程度、降低NK细胞的毒性及改善机体CD4+/CD8+T免疫失衡。3.polyI:C造成肝脏CD62L+NK在肝脏的聚集,有可能会加重PBC的进展。
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