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本论文包含两方面的研究:(1)制备并鉴定一个特异性结合食管癌细胞的单克隆抗体—SGB-8;(2)用RNA干扰技术降低了杂交瘤细胞中NFAT5的表达后观察其对杂交瘤细胞抗体生成的影响。(1)目的:食管癌是常见的发生在食管上皮组织的恶性肿瘤,本研究致力于研制一种单克隆抗体(单抗)能够特异性作用于食管癌细胞,从而为该肿瘤的临床诊断和治疗提供新手段。方法:以食管癌细胞免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备特异识别食管癌细胞的单抗;用间接ELISA鉴定免疫球蛋白的类别和亚类;以间接免疫荧光法检测抗体免疫活性;用SDS-PAGE检测纯化抗体纯度;以蛋白免疫印迹和免疫组织化学法测定抗体组织专一性;利用RT-PCR、测序等分子生物学技术克隆单抗可变区基因序列。结果:获得一株杂交瘤细胞,它所分泌的单抗SGB-8与食管癌细胞特异性结合;SGB-8抗体属于IgG 2a;纯化的抗体纯度达到90%以上;该单抗特异性识别食管癌组织,与正常成人组织和胎儿组织没有交叉反应;我们还克隆了该单抗的可变区序列,为将来抗体人源化打下了良好的基础。结论:该研究获得一种能够特异性结合食管癌细胞的单抗,将为食管癌的治疗提供了新的治疗手段。(2)在高渗透压培养条件下杂交瘤细胞生成的抗体量增加,其具体的机制仍然未知。在本研究中,我们提出NFAT5〔nuclear factor of activated T cells 5 (NFAT5)/ tonicity enhancer binding protein (TONEBP)〕在杂交瘤细胞中影响抗体的生成。NFAT5是哺乳动物体内对渗透压升高敏感的转录因子,它在体内广泛表达,其中许多器官并不处于高渗环境也表达NFAT5,这提示NFAT5的作用可能并不仅仅与渗透压变化相关,它在等渗环境中发挥着某种未知的作用。在本研究中,我们应用免疫印迹方法观察了NFAT5在杂交瘤细胞中的表达状况,发现当杂交瘤细胞处于高渗环境中时,其中的NFAT5表达显著增加。为了进一步研究NFAT5在杂交瘤细胞中的作用,我们使用RNAi技术下调了NFAT5在杂交瘤细胞(SGB-8)中的表达,结果发现在等渗环境中下调了SGB-8细胞中的NFAT5后抗体生成明显减少,同时细胞的增殖和生长并未受到影响。这些结果提示NFAT5不仅对于杂交瘤细胞适应渗透压升高过程中起着重要作用,而且对于抗体的生成也有重要影响。