论文部分内容阅读
研究目的：本实验旨在探讨川楝素对人肠癌SW480细胞的抑制作用及相关分子机制；研究方法：采用MTT比色法,观察不同浓度的川楝素分别作用人肠癌细胞株SW480不同时间后增殖的影响；AnnexinV/P1双染色法——使用流式细胞仪,检测川楝素对人肠癌细胞株SW480凋亡的影响；Hoechst33342染色法——应用荧光显微镜检测川楝素对人肠癌细胞株SW480凋亡形态的变化；应用流式细胞仪检测川楝素对人肠癌细胞株SW480细胞周期的影响；激光共聚焦显微镜下观察川楝素作用人肠癌细胞株SW480后β-catenin的核转位情况；实时荧光定量PCR法检测川楝素对人肠癌细胞株SW480相关基因表达的影响；免疫印迹法(Western Blotting)检测川楝素对人肠癌细胞株SW480的相关蛋白含量的影响。研究结果：0.031μM--0.5μM浓度的川楝素能抑制人肠癌细胞株SW480的增殖,具有时间及浓度依赖性；0.125μM、0.5μM浓度的川楝素作用人肠癌细胞株SW48048h后能明显引起早期凋亡,且形态学上观察到出现凋亡小体,并呈现浓度依赖性；与阴性对照组比较,0.125μM、0.25μM、0.5μM的川楝素作用人肠癌细胞株SW48024h后,随着药物浓度的增大,Go/G1期前出现明显的亚二倍体区,S期比例由19.40%上升至23.0%,细胞被阻滞于S期。0.5μM浓度的川楝素作用人肠癌细胞株SW48048h后,细胞核内的β-catenin向胞核外转移；0.125μM、0.5μM浓度的川楝素作用于人肠癌SW48048h后,Bax、Bak、GSK-3β表达上升,Bcl-2、Bcl-xL、Survivin、cyclin D1、cyclin D2、cyclin D3、β-catenin、VEGFA、c-myc、COX-2表达下降；0.125μM、0.5μM浓度的川楝素作用于人肠癌细胞株SW48048h后,其相关蛋白Bax、GSK-3β含量上升,Bcl-2、Pro-caspase3、Pro-PARP. P-AKTSer473、AKT、P-GSK-3β Ser9、β-catenin、VEGFA含量下降。研究结论：川楝素能体外抑制人肠癌细胞株SW480的增殖；川楝素能诱导人肠癌细胞株SW480凋亡；川楝素对人肠癌细胞株SW480的抑制作用可能是通过AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路实现的。