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T-2毒素为单端孢霉烯族毒性最强的真菌毒素之一,普遍存在水产饲料中。其发挥细胞毒性的重要机制是氧化应激,导致机体内大量的自由基产生。甲壳类动物的抗氧化防御系统为机体应对外界刺激的第一道防线,对虾长期暴露于T-2毒素环境下,抗氧化防御系统势必受到严重影响。本研究以对虾为实验对象,设定五个T-2毒素的暴露剂量(0.5、1.2、2.4、4.8、12.2 mg/kg·feed)和空白组,进行20天蓄积毒性实验后,取对虾的肌肉和肝胰腺组织备用。首先取对虾的肌肉组织采用线粒体16S rRNA gene进行种群鉴定,通过NCBI查找人和动物的16S rRNA基因,引物设计,成功的合成了保守序列的引物16SAR-L和16 SAR-H,确定实验样品为凡纳滨对虾。采用试剂盒的方法测定T-AOC和MDA,以及三种重要的代表性抗氧化CAT、SOD和GSH-PX,评价不同T-2毒素暴露剂量对机体的总抗氧化能力的影响和表征T-2毒素对抗氧化酶系统的影响。结果表明肝胰腺为T-2毒素氧化刺激和损伤的重要组织,对T-2毒素较敏感。暴露T-2毒素环境中可提高对虾肝胰腺的总抗氧化能力,同时MDA即氧化损伤程度与T-2毒素的剂量呈正相关。氧化损伤幅度显著高于总抗氧化能力的刺激幅度,表现为损伤效应。拟合结果显示:T-AOC与SOD和GSH-PX的模型类型相一致,均为GaussAmp。CAT活性在对虾肝胰腺和肌肉中其拟合模型分别为抛物线和Gauss,而MDA在肝胰腺和肌肉中分别为一元一次方程和抛物线方程。对虾肝胰腺在T-2毒素暴露剂量分别为3.63、1.78、3.31 mg/kg时,T-AOC、SOD和CAT分别出现刺激效应最大点;MDA在0.55 mg/kg时出现NOAEL;对虾肌肉中T-AOC、MDA、CAT和SOD分别在4.57、5.37、2.51、4.79mg/kg时出现NOAEL。采用实时荧光定量PCR的方法测定CAT和SOD的表达量。首先,通过多次引物的设计,摸索出一套可提高实验效率的方法,即手动设计和软件设计相结合的方法设计出CAT和SOD引物。在进行荧光定量PCR时,摸索出对虾样品用量为20 mg,退火温度在保证引物和模板有效结合,且避免非特异性结合的情况下,CAT和SOD的退火温度分别为56℃和58℃。T-2毒素对对虾体内CAT和SOD基因表达量均为先上升后下降,毒物兴奋效应。整体上肌肉比肝胰腺在CAT和SOD基因表达平上更为敏感。CAT基因的表达对T-2毒素更为敏感,约为SOD的2倍。采用HPLC法测定三种脂溶性维生素(VA、VD3、VE)的含量和试剂盒法测定GSH。T-2对对虾肌肉中的三种脂溶性维生素、GSH以及肝胰腺的GSH均可产生显著影响(p<0.05)。最佳色谱条件:①色谱柱:C18;②流动相:采用甲醇-水(100:0;v/v),流速为1.0 mL/min;③提取溶剂:用甲醇溶解样品;④检测器:采用紫外检测器,根据组分的吸收度,选择测定VA、VD3和VE的最大吸收波长分别为280、264和285 nm,检测限分别为0.09、0.06和0.13μg/m L。高剂量染毒时,VA和VD3含量显著下降(p<0.05),而VE的含量呈波动性变化。低剂量染毒时,VD3和VE含量显著升高(p<0.05),表现出低剂量刺激效应。GSH在肝胰腺中呈显著上升的趋势。拟合曲线结果显示,T-2毒素暴露下,对虾肌肉中,VA和VD3的拟合模型符合Gauss模型,与肌肉中CAT活性模型一致;GSH符合Gauss Amp模型,与T-AOC、SOD和GSH-PX模型一致;肝胰腺中GSH符合Boltzmann模型。表明机体在抵御T-2毒素的氧化应激反应时,多种物质协同作用。其中,VD3和GSH分别在8.31和2.09 mg/kg时,出现最大抑制效应;VA在0.96mg/kg时,出现抑制效应最小点。对以上各指标进行综合分析,T-2毒素可对抗氧化防御系统产生显著影响,发现对虾肝胰腺为主要的靶器官和储存库,对T-2毒素较敏感,且随着暴露剂量的增大,氧化损伤增大。对虾肌肉和肝胰腺的各种抗氧化成分在不同的暴露剂量下表现不同,且存在指标间相互影响,反应机制较复杂。对虾暴露在T-2毒素环境下,肝胰腺中的CAT主要表现为损伤效应,SOD和GSH-PX主要表现为刺激作用。而低剂量时,肝胰腺中SOD起主要刺激作用;中剂量时,SOD和GSH-PX起主要刺激作用。肌肉中VA、GSH-PX、GSH和VD3整体上表现为损伤效应,低剂量时,VA和GSH主要表现为损伤效应,中剂量为GSH-PX和GSH,高剂量为VD3;肌肉中CAT和SOD起主要刺激作用,而低剂量时,CAT起主要刺激作用;中剂量时为SOD。其中MDA为对虾抗氧化防御系统损伤的标志性指标,而标志性刺激指标,肝胰腺中为SOD,肌肉中为CAT。同时,找到了不同暴露剂量下,对虾肌肉和肝胰腺中各氧化指标的剂量反应曲线,一般表现为低剂量刺激,高剂量抑制效应。