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第一部分Syncytin-1表达异常对非小细胞肺癌细胞功能的影响目的:Syncytin-1在多种恶性肿瘤中发挥致癌作用,课题组前期已证实Syncytin-1在非小细胞肺癌组织中表达升高,但其具体作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨异常升高的Syncytin-1对非小细胞肺癌生物学功能的影响。方法:1.利用RNA干扰技术,敲除和过表达非小细胞肺癌细胞系A549中Syncytin-1,构建 sh-Syncytin-1 和 ov-Syncytin-1 A549 细胞系。2.通过 CCK-8增殖实验、平板克隆实验、流式分析、细胞划痕实验和Transwell实验,观察Syncytin-1对非小细胞肺癌细胞生物学功能的影响。3.转录因子SP1可以诱导人Syncytin-1启动子活性,对其细胞特异性表达至关重要,利用RNA干扰技术,敲除非小细胞肺癌细胞系A549中SP1,检测Syncytin-1表达改变。4.通过CCK-8增殖实验、基质胶侵袭实验和流式分析实验研究过表达Syncytin-1在SP1敲除细胞中的是否发挥致癌作用。结果:1.干扰Syncytin-1致使非小细胞肺癌细胞Nusap1、CyclinD1、CDK6、CDK4的表达降低,细胞周期被阻断在G1期,抑制细胞增殖。2.干扰Syncytin-1,细胞凋亡相关因子Bax、活化Caspase3和活化Caspase9表达增高,凋亡抑制因子Bcl2表达降低,非小细胞肺癌细胞凋亡增加。3.敲除Syncytin-1 N-cadherin、β-catenin和Vimentin的表达降低,细胞上皮间充质转化(EMT)过程被扭转,非小细胞肺癌细胞转移和侵袭受到抑制。4.敲除Syncytin-1,非小细胞肺癌细胞中Akt、mTOR和Erk1/2的磷酸化水平下降,提示Syncytin-1可能参与非小细胞肺癌细胞的Akt和Erk1/2信号通路。然而过表达Syncytin-1并没有增强非小细胞肺癌细胞增殖、转移和侵袭能力。5.敲除A549细胞中的转录因子SP1,下调了 Syncytin-1的表达。6.在SP1敲除的非小细胞肺癌细胞中,细胞增殖和转移能力降低,凋亡数量增加,Akt/mTOR信号通路被抑制,而过表达Syncytin-1可以逆转SP1敲除诱导的细胞功能抑制。结论:SP1/Syncytin-1轴的下调通过逆转肿瘤上皮间质转化过程和抑制Akt和Erk信号通路来抑制非小细胞肺癌细胞的的生物学功能,提示它们可能是非小细胞肺癌靶向治疗的潜在靶点。第二部分血清循环游离Syncytin-1作为新型分子标志物在非小细胞肺癌诊断中的研究目的:肺癌患者起病隐匿,约70%的患者诊断时已处于晚期,无法接受手术治疗。具有高特异性和敏感性的无创检测手段“液体活检”,有助于早期诊断恶性肿瘤,允许实时监测治疗进展和复发等。本课题旨在研究血清循环游离Syncytin-1作为新型分子标志物在非小细胞肺癌早期诊断中的价值。方法:1.收取首次诊断为非小细胞肺癌的患者血清样本,入选病例要求未接受过放疗、化疗等辅助治疗,无合并恶性肿瘤等其他重大疾病。2.利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR),检测非小细胞肺癌患者和健康对照的血清循环游离Syncytin-1表达水平,并分析其与非小细胞肺癌患者病理参数之间的相关性。3.建立受试者工作曲线(ROC曲线)评估血清循环Syncytin-1对非小细胞肺癌的诊断价值。4.利用免疫印迹实验和ELISA方法检测患者和对照组外周循环Syncytin-1蛋白表达水平。结果:1.106例非小细胞肺癌患者入选,包括56例男性患者和50例女性患者,平均年龄为(60±10)岁。2.非小细胞肺癌患者血清循环游离Syncytin-1(3.624±0.397)表达相比健康对照组(3.204±0.502)显著升高(P<0.0001),差异具有统计学意义;Syncytin-1表达水平与患者的病理参数之间无相关性。3.血清循环游离Syncytin-1诊断非小细胞肺癌的ROC曲线下面积AUC=0.739(P<0.0001),采用最佳cutoff值3.03时,血清循环游离Syncytin-1对非小细胞肺癌诊断的敏感性=45.28%,特异性=93.4%。4.非小细胞肺癌患者血清中Syncytin-1蛋白表达增高,与健康对照相比,差异具有统计学意义。结论:非小细胞肺癌患者外周血清中循环游离Syncytin-1 DNA和蛋白表达均增高,与患者的病理参数之间无明显相关性,Syncytin-1作为非小细胞肺癌诊断标志物的特异性较高,敏感性较低。