前言 喉癌是头颈肿瘤中的高发病，约占头颈肿瘤的13.9％，据世界各地报道，近年来喉癌的发病率有明显增长的趋势，严重危协人类健康和生存质量，肿瘤的浸润和转移是导致喉癌患者治疗失败和死亡的重要原因，而肿瘤发生浸润和转移的机理目前尚未明了。KAI1基因是新近发现的与肿瘤转移抑制相关的基因，定位于人染色体的11P11.2，其cDNA片段为2.4Kb，编码一种有267个氨基酸的蛋白质，分子量为29.61KD，其表达有多种调控机制并已在前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、结肠癌等多种肿瘤中发现表达下调并与肿瘤侵袭和转移相关，然其与喉癌发生、发展的相关性研究国内外尚未见文献报道。本研究通过观察KAI1在喉鳞癌、喉部不典型增生、喉息肉和癌旁正常喉粘膜组织中的表达，借以初步探讨其肿瘤特异性及其与喉鳞癌发生、发展的相关性，并探寻喉癌早期诊断、临床分期及其侵袭、转移潜能评估的参考指标，为临床制定治疗方案提供分子生物学参考依据。 材料与方法 选用中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科2002年1月～2002年10月行手术治疗的原发性喉鳞癌标本84例，其中男性70例，女性14例，年龄37～80岁，平均62.8岁，按照1997年UICC头颈部恶性肿瘤分期标准进行临床分期，临床Ⅰ期19例（T₁N₀M₀19例），临床Ⅱ期35例（T₂N₀M₀35例），临床Ⅲ期16例（T₃N₀M₀11例，T₂N1M₀1例，T₃N1N₀M₀4例），临床Ⅳ期14例（T₄N₀M₀6例，T₂N₂M₀2例，T₃N₂M₀3例，T₄N₂M₀3例）；声门型42例，声门上型34例，声门下型3例，跨声门型5例；按病理分级，高分化癌 34例，中分化癌 32例，低分化癌 18例（随访资料暂缺人另分别选喉部不典型增生病变组织标本27例，声带息肉和经病理确诊的癌旁正常喉粘膜标本各10例。全部标本均由病理医师取材，经4％多聚甲8F／0．IM PBS（含有 1／1000DEPC）固定，石蜡包埋，切片厚sp，贴附于多聚赖氨酸处理的载玻片上备用。 用KAll探针采用原位杂交方法检测喉鳞癌、喉不典型增生。声带息肉及癌旁正常喉粘膜组织中KAll的表达。DAB显色。不加探针为空白对照。结果判断：以胞浆出现定位清晰的棕黄色颗粒状物为阳性。计算机图像分析：采用 Metamorph mager SystemV4．6彩色多媒体图像分析系统，对每张切片的原位杂交染色结果进行定量分析，每张切片均选取不相重叠的五个代表性部位，在40倍物镜采集图像并测量组织阳性细胞的积分吸光度值，取其均值为该标本测量结果。统计学分析：应用SPSS统计软件处理数据，组间表达程度比较采用 t检验，P＜0．05有统计学意义。 结 果 1．KAll在喉鳞癌、喉不典型增生。声带息肉及癌旁正常喉粘膜四种组织中有不同强度的阳性表达，其阳性染色为上皮细胞胞浆中出现棕黄色颗粒状物。 2．KAll在癌旁正常喉粘膜和声带息肉组织中有较强的阳性表达，其积分吸光度k值）（5。S）分别为136206．8土36盯5．536和1353M．53。纠113．＊8，两者差异无显著性（t＝O．阶8，P＞0．05XKAll在喉不典型增生和喉鳞癌组织中表达较弱或仅有少量散在阳性表达，其积分吸光度M值八k t S）分别为 93266．63。15139．935和6788o．6M。2幻89．534，与癌旁正常喉粘膜及声带息肉组捻异有显著性汐＜o．01人 ·2· 3．KAll在84例喉鳞癌组织中的阳性表达强度与肿瘤组织病理分级、临床分期及颈部淋巴结转移呈负相关u＜0．01入与患者性别之差异无显著性。 结 论 1．正常喉粘膜有较强的KAll阳性表达，表明喉可能是KAll表达的组织特异性器官之一，提示KAll作为肿瘤转移抑制基因其功能失活或降低可能与喉鳞癌的发生、发展相关。 2．喉不典型增生组织和喉鳞癌组织中KAll表达下调，且其在不典型增生组织中的表达已明显下调，因而推测KAll表达下调可能是喉鳞癌发生、发展中的早期件。 3．KAll在原发性喉鳞癌组织中表达普遍下调，因而推测KAll的下调不仅是喉鳞癌发生、发展中的早期事件，而且是普遍事件。 4．喉鳞癌KAll的阳性表达强度与病理分级J分期、淋巴结转移及临床分期呈负相关。研究结果初步表明，KAll基因低表达可能是肿瘤发生、发展和颈淋巴结转移的相关因素，可望作为喉鳞癌敏感而可靠的分子标记之一，为临床早期诊断和评估喉鳞癌的侵袭转移潜能及发展阶段进而指导治疗方案提供分子生物学参考依据。