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目的:胃癌(gastric cancer,GC)是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率位居全球第四,癌细胞转移侵袭是引发胃癌患者死亡的重要原因。S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)是 Skp1-Cullin-F-box(SCF)E3 泛素连接酶复合物中的F-box蛋白。研究表明Skp2在胃癌组织中过表达,并与胃癌的预后呈负相关,而下调Skp2能有效抑制胃癌细胞的转移。桦木酸(betulinic acid,BA)主要来源于白桦树树皮内,是一种天然的五环三萜类化合物。诸多研究表明桦木酸具有显著的抗肿瘤作用,并且可以选择性的作用于癌细胞,在多种肿瘤中展现出显著的抗肿瘤活性。目前,桦木酸通过下调Skp2抑制胃癌转移侵袭的作用机制还未见有报道。本研究利用SGC7901和BGC823两种胃癌细胞系,进一步深入探讨桦木酸通过作用Skp2信号通路抑制胃癌细胞转移侵袭的分子机制。方法:本研究主要利用细胞增殖实验、划痕实验和细胞侵袭实验、分子对接技术和免疫共沉淀方法、蛋白半衰期实验、蛋白免疫印迹、实时定量PCR、凝胶电泳实验等进一步探讨桦木酸通过靶向Skp2抑制胃癌细胞(SGC7901和BGC823)转移侵袭的机制。①MTT和细胞增殖实验检测桦木酸对胃癌细胞的杀伤效果和增殖抑制作用;②划痕实验和侵袭实验分析桦木酸对胃癌细胞的转移和侵袭能力影响;③分子对接技术和免疫共沉淀方法评估桦木酸对Skp1-Skp2复合物的靶向作用;④蛋白半衰期实验评价桦木酸对胃癌细胞中Skp2蛋白稳定性;⑤蛋白免疫印迹检测桦木酸对胃癌细胞中Skp2蛋白和相关转移蛋白表达的影响;⑥实时定量PCR和凝胶电泳实验验证桦木酸对胃癌细胞中Skp2 mRNA转录水平的调节作用;⑦利用慢病毒感染过表达Skp2进一步验证桦木酸通过靶向Skp2调节胃癌细胞转移和侵袭的作用。成果:MTT和细胞增殖实验结果显示桦木酸对胃癌细胞有显著的杀伤作用,并明显的抑制其增殖,且在一定浓度范围内(0-60 μ M)对正常的胃粘膜上皮细胞(GES-1)没有产生明显的毒性作用;划痕实验和细胞侵袭实验结果证明桦木酸以浓度依赖性方式抑制胃癌细胞的转移和侵袭,且Skp2过表达时会拮抗桦木酸对胃癌细胞转移、侵袭的抑制效果;分子对接技术和免疫共沉淀证实桦木酸通过氢键结合Skp1-Skp2复合物并抑制Skp1-Skp2相互作用,进一步通过蛋白半衰期实验表明桦木酸能降低Skp2蛋白稳定性,促进Skp2降解;蛋白免疫印迹结果表明桦木酸能明显抑制Skp2和转移相关蛋白MMP2/9蛋白表达,上调p27蛋白表达;实时定量PCR和凝胶电泳实验显示桦木酸对Skp2 mRNA表达具有下调作用;同时,在胃癌细胞中通过慢病毒感染并过表达Skp2能明显减弱桦木酸对胃癌细胞的转移抑制作用。结论:本研究结果证实桦木酸以氢键的方式直接作用于Skp1-Skp2复合物的蛋白结合口袋区域并抑制Skp1与Skp2相互作用,进一步研究发现桦木酸作用于Skp2-p27信号通路诱导胃癌细胞增殖抑制,且通过作用Skp2-Sp1-MMP2/9信号通路抑制SGC7901和BGC823胃癌细胞转移、侵袭。下一步将进一步探讨桦木酸通过靶向Skp2抑制胃癌细胞在体内转移的影响。