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目的：从人心脏cDNA文库中筛选出与CVB3VP3蛋白相互作用的人细胞蛋白。方法：1.采用PCR技术扩增出VP3基因，将其插入到真核表达质粒pGBKT7中构建重组诱饵质粒pGBKT7-VP3；2.采用乙酸锂法将pGBKT7-VP3转化至酵母菌AH109中，通过表型鉴定、PCR法验证质粒pGBKT7-VP3是否转化至酵母菌中；3.利用Western blot检测酵母菌AH109[pGBKT7-VP3]中VP3蛋白的表达；4.利用营养缺陷培养基以及酶底物X-α-Gal的变化情况检测VP3基因对报告基因（HIS3、ADE2和MEL1）的转录自激活作用；5.经小规模配合试验检测VP3蛋白对酵母菌配合功能的影响；6.利用大规模酵母配合实验筛选人心脏cDNA文库；7.经阳性克隆的表型确定、PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等试验将阳性克隆归类，并进行测序和同源性比对分析；8.采用α-半乳糖苷酶定量分析VP3蛋白与各阳性蛋白之间相互作用的强弱；9.利用营养缺陷培养基以及酶底物X-α-Gal的变化情况检测阳性文库质粒pGADT7-ADx对报告基因（HIS3、ADE2和MEL1）的转录自激活作用；10.利用回返配合试验对筛出的各阳性蛋白与VP3蛋白的相互作用再次进行验证。结果：1.双酶切及序列分析提示VP3基因已成功插入pGBKT7载体的多克隆位点，并且阅读框与病毒VP3基因一致；2.表型鉴定和PCR法验证pGBKT7-VP3质粒已成功转入酵母菌AH109中；3. Western blot证实酵母菌AH109[pGBKT7-VP3]能表达VP3蛋白；4.营养缺陷型培养基和酶底物X-α-Gal变化情况显示VP3蛋白对报告基因无转录自激活作用；5.小规模配合试验表明VP3蛋白在AH109的表达基本不影响酵母菌正常的配合功能。6.以CVB3VP3为诱饵蛋白，从人心脏cDNA文库中筛选到50个阳性候选克隆；7.经阳性候选克隆的初步分析将阳性克隆归为10类，并经测序和同源性比对，最后共获得10种不同类别的阳性蛋白：线粒体乙醛脱氢酶2（ALDH2）、内质网-高尔基体中间室蛋白1（ERGIC1）、真核翻译起始因子4A2（EIF4A2）、肌钙蛋白I3型（TNNI3）、平滑肌蛋白3（LMOD3）、羟酰辅酶A脱氢酶三官能蛋白转录变体3（HADHB）、门冬酰胺酶同系物（ASPG）、3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）、肌肉型肌酸激酶（CKM）、骨骼肌α1肌动蛋白(ACTA1)。8. α-半乳糖苷酶定量试验进一步证明了筛选出的10种阳性蛋白与VP3蛋白均有较强的相互作用；9.筛选出的10种阳性蛋白对报告基因无转录自激活作用；10.回返配合试验再次验证10种阳性蛋白与VP3蛋白存在相互作用。结论：1.成功构建了重组质粒pGBKT7-VP3；2. CVB3VP3蛋白是一个适合用于酵母双杂交系统的诱饵蛋白；3.以CVB3VP3为诱饵蛋白，应用大规模酵母配合实验，从人心脏cDNA文库中获得10种与VP3蛋白发生相互作用的人细胞蛋白：ALDH2、ERGIC1、EIF4A2、TNNI3、 GAPDH、LMOD3、HADHB、ASPG、CKM、ACTA1；