通过外源基因在E. coli中的表达来获得蛋白质类药物，已经成为生产基因工程药物的重要手段，然而重组蛋白质在E. coli中易聚集形成不溶性、无活性的包涵体，如何对包涵体蛋白进行高浓度、高收率的复性，是重组蛋白质生产的关键性技术之一，且关系到基因工程药物的产业化。为此，本文对重组人干扰素-γ包涵体的重折叠复性进行了研究，以有助于这一问题的解决。 首先对重组人干扰素-γ基因工程菌（pBV220IFN-γDH5α）的培养条件进行了研究，通过考察不同的培养和诱导时间，并对培养基的组成和发酵条件进行了优化，得出了优选实验方案：人干扰素-γ基因工程菌在30℃培养8h，升温至42℃诱导6h，培养基组成为葡萄糖2g／L，胰蛋白胨15g／L，酵母提取物7.5g／L，NaCl 5g／L，Na₂HPO₄·12H₂O 12.6g／L，KH₂PO₄ 3g／L，NH₄Cl 1.0g／L，1mol／L MgSO4 2mL／L，发酵条件为摇床转速：220r／min，接种量：1％，装液量：20％，pH：6.8。按此方案进行发酵实验，表达的人干扰素-γ包涵体占菌体总蛋白的60％以上，每升发酵液可获得1.6g包涵体。 稀释复性法是研究其它复性方法的基础。为消除杂质对复性的影响，在复性前，应对包涵体粗品进行洗涤。Triton X-100能有效地溶解杂蛋白，洗涤后的包涵体纯度可达88％左右。7mol／L盐酸胍和8mol／L尿素能有效溶解重组人干扰素-γ，包涵体。在4℃、pH 8.0、尿素浓度1.0mol／L、蛋白浓度0.1mg／mL及脉冲加样操作方式等条件下，复性后人干扰素-γ的活性为2.39×10⁵IU／mL，比活达2.21×10⁷IU／mg。 以SP Sepharose Fast Flow尿素梯度离子交换层析柱作为蛋白质复性系统，在高蛋白浓度下，能有效地复性重组人干扰素-γ，包涵体，并实现了复性和纯化的过程集成化。在上样量：2.5mg；流速：0.5mL／min；尿素梯度长度：3.4Column Volume；尿素终浓度：2mol／L的实验条件下，复性后人干扰素-γ的比活为7.5×10⁵IU／mg，蛋白收率为：54％，纯度＞95％。利用Superdex 75凝胶柱，分析离子交换层析复性的样品，证实重组人干扰素-γ的纯度很高，并且没有聚集体存在。 扩张床的处理量大，通过逐渐降低层析柱内的尿素浓度，使吸附在STREAMLINE SP凝胶上的蛋白质复性，在完成复性的同时又纯化了目标蛋白，实现了复性和纯化的集成化。在上样量：23.2mg；膨胀率：2.5；尿素梯度长度：6CV；尿素终浓度：3mol／L的实验条件下，复性后人干扰素-γ的比活为8.18×10⁶IU／mg，蛋白收率为：52.7％，纯度＞90％。浙江大学博士学位论文摘要 小分子伴侣Shi GroEL191一345在E.。011中表达、经3.7L罐发酵，再经过Ni一NTA亲和层析和脱盐两步纯化步骤，最终收获目标蛋白为216.2m留L发酵液，小分子伴侣Sht GroELI 91一345的总收率约80%，纯度大于95%。游离和固定化小分子伴侣sht GroEL191一345小分子伴侣能有效地协助rhIFN一丫包涵体的复性，在蛋白浓度100抖g/mL、巧℃、复性4h的条件下，复性后人干扰素一Y的总活性分别为6.63xl护Iu/mL和9.67x10s Iu/mL，蛋白收率分别为:32.5%和47.5%。 经荧光光谱测定，重折叠人干扰素一了的构象接近于天然构象，表明复性较为完全。