【摘 要】
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目的1.构建FFLuc重组表达的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)菌株,并利用其进行抗结核药物体外药效学评价。2.运用重组表达FFLuc结核分枝杆菌和重组表达iRFP重
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目的1.构建FFLuc重组表达的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)菌株,并利用其进行抗结核药物体外药效学评价。2.运用重组表达FFLuc结核分枝杆菌和重组表达iRFP重组菌株感染小鼠,评估重组结核分枝杆菌用于抗结核药物体内药效学评价的可行性。方法1.构建重组表达质粒pMV361+FFLuc,应用小动物活体成像系统鉴定FFLuc表达。检测不同浓度的抗结核药物作用不同时间的表达荧光量变化,建立以FFLuc标记MTB为基础的测定抗结核药物MIC的方法。2.用重组表达FFLuc结核分枝杆菌以尾静脉注射,气溶胶方式感染小鼠,用重组表达iRFP结核分枝杆菌以皮下注射方式感染小鼠,小动物活体成像仪检测小鼠体内和离体脏器发光情况。结果1.pMV361+FFLuc重组表达载体构建的稳定表达FFLuc的MTB菌株建立MIC检测,应用新方法检测药物的MIC与MABA法MIC测定结果基本相同。2.尾静脉注射感染重组表达FFLuc结核分枝杆菌的小鼠腹部,胸部和离体脾脏,肺脏可检测到生物发光信号。3.皮下注射感染重组表达iRFP结核分枝杆菌小鼠体内未检测到目的荧光信号。结论1.重组表达FFLuc结核分枝杆菌可用于抗结核药物体外药效学快速评价。2.重组表达FFLuc结核分枝杆菌用于小鼠体内药效学评价具有可行性,仍需进一步研究。
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