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前言:
基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)也称基质酶属于锌-钙以赖性家族肽链内切酶,它的主要作用是降解细胞外基质和促进各种生物学因子的转化[1,2]。基质金属蛋白酶在正常的生理过程中扮演者重要的角色,例如:胚胎的形成和发展,组织的重塑等;它还参与许多病理过程,包括:炎症,肿瘤和心血管疾病等[1,3-7]。基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶13(MMP-13)作为基质金属蛋白酶家族的成员在上述过程中发挥了重要作用。正常情况下MMPs的表达和活性通过控制转录水平,酶原活性,抑制因子的抑制作用,细胞的吞噬等途径的调节处于一个相对稳定的状态,不正常的表达和活性异常与许多疾病有着密切的关系[8]。MMP-2又称白明胶酶A,能降解明胶和Ⅳ型胶原纤维,二者是基底细胞膜的主要组成成分[9,10]。MMP-13又被称作胶原酶Ⅲ,能广泛降解基底膜的各种成分[11,12]。大疱性类天疱疮(bmullous pemphigoid,BP)是以循环中存在自身抗体直接反对基底膜半桥粒蛋白为特点的自身免疫性表皮下水疱类疾病,多见于老年人[11]。BP抗原主要有两种:BP180和BP230,目前认为BP180是主要的抗原。自身抗体结合BP抗原形成免疫复合物激活补体,然后促进炎性细胞迁移,导致表皮与真皮分离,引起表皮下水疱的形成[13,14]。真皮和表皮的分离必然伴随着细胞基质的降解,MMPs可能在大疱性类天疱疮的发生和发展过程中发挥着同样重要的作用,为此我们在前人研究的基础上,选择性的检测MMP-2,MMP-13在大疱性类天疱疮患者皮损和血清中的表达,以便在印证MMPs在疾病中的作用的同时,进一步研究MMP-2,MMP-13与大疱性类天疱疮的关系!
材料和方法:
一、实验材料
(一)
1、病例与标本
病例组:大疱性类天疱疮患者皮损32例,女15例,男17例。年龄34~87岁,平均65.0±15.1岁;均来自中国医科大学附属第一医院皮肤科,经临床、组织病理、直接免疫荧光、间接免疫荧光确诊为大疱性类天疱疮,且均未接受过治疗。
对照组:正常皮肤组织15例,女7例,男8例,年龄28~81岁,平均59.9±13.6岁,均为中国医科大学附属第一医院整形外科非皮肤病患者。
2、主要试剂:鼠抗人MMP-2、MMP-13单克隆抗体(美国R&D),山羊抗鼠IgG的SP试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。
(二)
1、病例与标本:
(1)病例组:24例大疱性类天疱疮患者的皮损和血清,女10例,男14例。年龄44~87岁,平均(67.4±15.0)岁;均来自中国医科大学附属第一医院皮肤科,经临床、组织病理、直接免疫荧光、间接免疫荧光确诊为大疱性类天疱疮,且均未接受过治疗。
(2)对照组:正常皮肤组织15例,女7例,男8例,年龄28~81岁,平均(59.9±13.6)岁,均为中国医科大学附属第一医院整形外科非皮肤病患者。正常血清24例,女12例,男12例,年龄27~80岁,平均(62.4±13.7)岁,均为无疾病史的健康人。
2、主要试剂:鼠抗人MMP-2单克隆抗体(美国R&D),山羊抗鼠IgG的SP试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司);人MMP-2 ELISA试剂盒(R&D)。
二、实验方法
(一)用免疫组织化学方法检测大疱性类天疱疮患者和正常对照组皮肤组织中MMP-2、MMP-13的表达。
(二)用免疫组织化学方法和酶联免疫法(ELISA)分别检测MMP-2在病例组与对照组皮肤组织的表达情况和血清中的分泌水平。
(三)统计学分析:应用SPSS16.0版统计软件,进行t检验和Pearson相关检验分析,P<0.05认为有统计学意义。
结果:
一、免疫组织化学方法结果显示:在32例大疱性类天疱疮患者中表达MMP-2,MMP-13的阳性细胞数分别为(38.56±10.06)和(18.62±5.90),较正常对照组(21.20±5.98)和(11.47±8.48)均有明显增加,有统计学差异(P<0.05);且相关分析显示MMP-2与MMP-13的表达存在一定的相关性。
二、免疫组化结果显示:在24例大疱性类天疱疮皮损中表达MMP-2的阳性细胞个数(36.21±8.54)较对照组(21.20±5.98)是显著增加的,有统计学意义(t=5.95,P<0.05):ELISA结果显示:在大疱性类天疱疮患者的血清中MMP-2的分泌水平(38.54±23.00 ng/ml)较正常人(17.51±5.45 ng/ml)也是显著增加的,统计学分析(t=4.36,P<0.05)有差异。
结论:
1、MMP-2、MMP-13在大疱性类天疱疮皮损中的表达均升高,且MMP-2与MMP-13的表达可能存在一定的相关性,提示MMP-2和MMP-13可能在BP的发病机制中起一定作用。
2、MMP-2在大疱性类天疱疮患者皮损中的表达和血清中的分泌水平均有增加,提示MMP-2可能在大疱性类天疱疮患者的发病机制中起重要作用。