人纤维蛋白原(human fibrinogen, Fg)是血浆中的蛋白成分,含量高达2～4g/L,在人凝血系统中发挥着关键作用,凝血的最后阶段是Fg在凝血酶的作用下转变为纤维蛋白,纤维蛋白和其他血细胞成分聚集成不溶性团状物达到止血的目的。Fg除直接参与凝血过程外,还在血小板聚集,血液粘度方面起着重要作用,是心、脑血管病发病的重要原因。Fg缺乏常见的相关疾病包括：先天性纤维蛋白原减少或缺乏症,由于肝损伤严重、肝硬化、弥散性血管内凝血、外伤、产后大出血、大手术、内出血等导致的获得性纤维蛋白原缺少症。由于先天因素引起的减少或缺乏症,补充Fg是目前唯一可靠的治疗方法,而对于后天不同因素引起的减少或缺乏症,根据病因的不同,也需要输注不同剂量的Fg制剂,另外,Fg还是一种止血用的军事战略储备药品,每年必须有一定的储备量。然而,目前我国只有少数几个血液制品单位具备Fg制剂生产能力,2008到2010年间正在生产的几家企业的产量也非常有限,3年间全国总产量不足10万瓶。使Fg制剂在临床上一直处于供不应求状态。故本课题拟利用公司现有的血浆来开发Fg制剂生产工艺,制备出符合中国药典要求的产品,缓解临床急需的局面。本课题的研究内容和取得的成果有以下几方面：1通过对现有血液制品工艺各组分研究,确定了制备Fg的原料我们对该产品的生产用原料进行了详细的研究,通过对多批次原料血浆、冷沉淀、酸沉淀和Cohn氏组分Ⅰ+Ⅲ进行了蛋白质含量、Fg纯度、Fg凝固活力进行了实验分析,同时评估了原料的选择对公司现有产品线的影响,最终选定酸沉淀为Fg制备工艺的原料。酸沉淀是生产人凝血因子Ⅷ (human coagulation factor Ⅷ,FⅧ)过程中产生的富集Fg的酸性沉淀,该沉淀在现有生产体系中作为废弃物处理,选择酸沉淀作为Fg制备原料能够进一步提高人血浆的综合利用率,产生更大的经济效益和社会效益。2确定了Fg工艺路线,得到了高纯度的Fg原液经研究确定了Fg制备工艺路线：健康人新鲜冰冻血浆经离心制取冷沉淀,再经酸沉淀、DEAE-650M柱层析分离纯化,然后经过S/D法灭活脂包膜病毒,之后经过两步甘氨酸/氯化钠沉淀去除S/D,超滤获得Fg原液,经检定,Fg原液纯度大于90%,凝固时间小于30s。该工艺没有选取国内常用的低温乙醇法,避免了乙醇对蛋白变性的影响,同时降低了工艺本身对温度精度的要求。3选取了适合Fg生产工艺的的病毒灭活方法,并对病毒灭活效果进行了验证在制品安全性上,2005版《中国药典》颁布之后,新的标准要求血液制品特别是凝血因子类制品要经过针对脂包膜病毒和非脂包膜病毒的有效病毒灭活步骤。我们在病毒灭活工艺上做了详细而且可靠的试验,确定使用有机溶剂／去污剂法(solvent/detergent, S/D)和干热法,分别灭活脂包膜病毒和非脂包膜病毒。我公司委托中国军事医学科学院对我公司生产的三批人Fg进行病毒灭活验证。批号分别为：200908S01、200909S02、200909S03。验证结果显示：三批人Fg中间品溶液经过S/D法灭活后,均无可以检测到的HIV、PRV和Sindbis,即可使HIV、PRV和Sindbis的滴度下降4个log以上。同时对EMCV的干热灭活病毒效果进行了验证,病毒灭活效果符合国家要求。4通过中试放大,制备了样品,进行了稳定性研究,获得了临床试验批件本课题对中试制备的规格为0.5g/瓶,批号分别为：201001S02、201002S03、201003S04的Fg制剂进行25℃的加速试验和2～8℃的长期稳定性研究,产品的外观、真空度、复溶时间、可见异物、pH和稳定性(复溶后37℃温育60min无凝块或纤维蛋白析出)、Fg含量、凝固活力等与上市的产品进行了质量对照比较研究。结果表明：我公司试制的3批制品的各项指标全部合格；与对照品的对比研究表明,我公司试制品和上市对照品的各项指标都在合格范围之内,部分指标的检定结果还要优于对照品。2012年3月已获得国家食品药品监督管理局的临床试验批件,临床试验正进行中。