Janus激酶抑制剂AG490对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力的影响及机制

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目的:研究Janus激酶抑制剂AG490对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力的影响,初步探讨JAK2/STAT3信号通路在肝癌侵袭调控中的作用机制。方法:1、应用不同浓度AG490处理人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法检测AG490对肝癌细胞的生长抑制作用。2、选用对SMMC-7721细胞增殖抑制作用不显著的药物浓度5μmol/L和10μmol/L处理细胞,采用Transwell小室检测AG490对肝癌细胞的侵袭能力和转移能力的影响。3、终浓度为5μmol/L和10μmol/L的AG490作用细胞48h后,RT-PCR检测MMP-2mRNA和VEGF mRNA表达的变化,Western-blot检测STAT3、MMP-2、VEGF蛋白的表达和活化。结果:JAK激酶抑制剂AG490处理人肝癌细胞48h后,细胞迁移试验结果显示对照组透膜细胞数为(120.2±13.9)/视野,5μmol/LAG490组透膜细胞数为(81.4±8.6)/视野,10μmol/L AG490组透膜细胞数为(54.4±6.7)/视野,显示细胞迁移通过Transwell小室孔的能力显著降低(P<0.05)。Transwell侵袭试验结果显示对照组透膜细胞数为(74.6±6.3)/视野,5μmol/L AG490组透膜细胞数为(58.2±7.2)/视野,10μmol/L AG490组透膜细胞数为(38.2±5.7)/视野,细胞侵袭人工基底膜Matrigel基质胶的能力显著降低(P<0.05)。RT-PCR结果显示MMP-2mRNA和VEGF mRNA表达均降低(P<0.05),Western-blot结果显示p-STAT3的活化降低,MMP-2及VEGF蛋白表达降低(P<0.05)。结论:1、AG490能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长,细胞的增殖水平明显下降,且随作用浓度的增强和作用时间的增加,细胞增殖抑制情况更加明显。2、经AG490作用肝癌SMMC-7721细胞后,细胞的转移和侵袭能力下降。3、AG490作用细胞后,细胞MMP-2、VEGF mRNA及蛋白表达水平下调是SMMC-7721细胞侵袭能力降低的可能的机制之一。4、AG490可能是阻断STAT3蛋白的激活抑制JAK2/STAT3信号通路传导,从而抑制肝癌SMMC-7721细胞的转移及侵袭能力。
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