第一部分MPTP介导的亚急性帕金森病小鼠模型的建立及神经行为学观察目的:建立亚急性帕金森病小鼠模型,观察该小鼠模型的行为学及病理学的改变。方法:雄性C57BL/6小鼠（8-10周,24-28g）适应1周后,随机分为对照组（生理盐水）和MPTP处理组。小鼠每天给予一次30mg/kg MPTP（腹腔注射）,连续5天。在最后一次给予MPTP的7天后,小鼠进行旷场实验、爬杆实验及游泳实验检测其运动功能。心脏灌注法取小鼠脑组织做TH免疫组织化学染色,观察黑质TH阳性神经元的数量及纹状体TH阳性纤维密度的改变。结果:与生理盐水对照组相比,MPTP组小鼠在旷场中运动的总路程、跨格数及竖立次数均显著减少;在爬杆总时间上有显著延长;在游泳评分上有显著减低;黑质TH阳性神经元的数量及纹状体TH阳性纤维数量明显减少。结论:本部分的方法能够成功建立MPTP介导的亚急性帕金森病小鼠模型,并模拟部分帕金森病行为学异常并符合帕金森病的病理表现。第二部分褪黑素对MPTP介导的亚急性帕金森病小鼠模型的行为学及黑质纹状体多巴胺能系统的影响目的:通过建立亚急性帕金森病小鼠模型,观察褪黑素对该小鼠模型的行为学及病理学指标的影响,观察其是否对多巴胺能神经元具有保护作用。方法:雄性C57BL/6小鼠（8-10周,24-28g）适应1周后,随机分为5组,分别为生理盐水对照组、褪黑素对照组、帕金森病组、低剂量组（10 mg/kg褪黑素）及高剂量组（30mg/kg褪黑素）。采用第一部分已验证的方法制作亚急性帕金森病小鼠模型。在小鼠给予MPTP前半小时及之后三小时给予褪黑素（10-30 mg/kg,溶于5%乙醇溶液）,连续5天。在最后一次给予MPTP的7天后,小鼠进行旷场实验、爬杆实验和游泳实验,随后提取小鼠脑组织,采用蛋白免疫印迹法检测黑质及纹状体TH蛋白表达的变化;心脏灌注法取小鼠脑组织做TH免疫组织化学染色,以观察黑质TH阳性神经元数量及纹状体TH阳性纤维数量改变。结果:行为学结果发现,与帕金森病组相比,低剂量和高剂量褪黑素组小鼠在旷场中运动的总路程、跨格数及竖立次数均显著增加;在爬杆总时间上显著缩短;在游泳评分上显著增高。TH免疫组化结果发现,与帕金森病组相比,低剂量和高剂量褪黑素组小鼠黑质TH阳性神经元数量显著增多;且纹状体TH阳性纤维数量明显增加;同时,低剂量和高剂量褪黑素组小鼠的黑质和纹状体TH的蛋白表达水平显著增加。结论:褪黑素能够改善PD小鼠行为学指标,并对MPTP介导的黑质纹状体多巴胺能系统的损伤具有保护作用。第三部分褪黑素对MPTP介导的亚急性帕金森病小鼠模型保护作用的机制研究目的:通过建立亚急性帕金森病小鼠模型,观察褪黑素对该小鼠模型多种分子学指标的影响,进一步探讨其神经保护的作用机制。方法:雄性C57BL/6小鼠（8-10周,24-28g）适应1周后,随机分为5组,分别为生理盐水对照组、褪黑素对照组、帕金森病组、低剂量组（10 mg/kg褪黑素）及高剂量组（30mg/kg褪黑素）。采用第一部分已验证的方法制作亚急性帕金森病模型。在小鼠给予MPTP前半小时及之后三小时给予褪黑素（10-30 mg/kg,溶于5%乙醇溶液）,连续5天。在最后一次给予MPTP的7天后,心脏灌注法取小鼠脑组织进行iba-1免疫组织化学染色,以观察黑质区激活的小胶质细胞数量变化。提取小鼠黑质组织,采用实时定量荧光PCR检测黑质i NOS、CD86、CD206、Arg1、IL-1β和IL-6的m RNA表达水平变化;采用氧化还原反应相关试剂盒检测黑质MDA含量;采用蛋白免疫印迹法检测黑质i NOS、IL-6、p-P38、P38、p-ERK、ERK、p-JNK及JNK蛋白表达的变化。结果:与帕金森病组相比,低剂量和高剂量褪黑素组小鼠黑质区激活的小胶质细胞数量显著减少。与帕金森病组相比,低剂量和高剂量褪黑素组小鼠黑质i NOS、CD86、IL-1β和IL-6的m RNA表达水平显著减低,而CD206和Arg1的m RNA表达水平显著增加。低剂量和高剂量褪黑素组小鼠黑质MDA含量较帕金森病组显著降低。低剂量和高剂量褪黑素组小鼠黑质i NOS、IL-6、p-P38/P38、p-ERK/ERK、pJNK/JNK的蛋白表达水平较帕金森病组显著降低。结论:褪黑素可能通过抑制小胶质细胞激活,促进其由M1型向M2型转化,抑制促炎细胞因子的生成及氧化应激,从而在MPTP帕金森小鼠模型中发挥多巴胺能神经元保护作用,上述过程可能受MAPKs信号通路介导。