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肿瘤抑制蛋白p53维持细胞基因组和细胞内环境的稳定。DNA损伤、致癌物刺激或缺氧,都能引起p53在细胞内累积和激活,阻止受损细胞分裂增殖,启动细胞凋亡程序,防止受损的细胞分化成癌细胞。p53功能的丧失往往和癌症的发生相关。在人类的所有恶性肿瘤中,50%以上都会出现p53基因的突变失活。在那些没有发生p53基因突变的癌症中,其p53功能往往也由于其它因素的影响而失活。一些蛋白质能与p53蛋白作用,从而影响p53蛋白的稳定性、DNA结合、转录活性或细胞定位,导致其正常生物学功能的丧失。因此,鉴定新的与p53相互作用的蛋白可以让我们更深入的了解p53活性的调控机制。CCDC106蛋白是通过酵母双杂交鉴定出来的和p53相互作用的蛋白,但是其序列、在细胞内和p53的相互作用以及由此产生的细胞生物学功能没有被实验进一步的研究证明。在本研究中,我们克隆了CCDC106基因的全长cDNA序列,并发现CCDC106基因有三个转录剪接体；由于剪接受体位点的不同使三个转录剪接体的第二个外显子长度出现差异,但是三个转录剪接体有同一个843bp的开放阅读框,编码280个氨基酸、分子量是32KDa的蛋白。我们制备了CCDC106蛋白的多克隆抗体,并用此抗体进行western blot分析,发现CCDC106蛋白在具有野生型p53蛋白的癌细胞系NCI-H292和HeLa中高表达。在荧光显微镜下观察发现,EGFP-CCDC106融合蛋白和内源性CCDC106蛋白都定位于细胞核中,表明CCDC106是一个核蛋白。通过LOCtree软件分析,我们发现CCDC106蛋白在151-164位氨基酸处有2个核定位信号(NLS1,151RRR153和NLS2,162RRR164)。突变这2个核定位信号中的任一个都会导致CCDC106蛋白定位发生改变,说明这2个核定位信号决定CCDC106蛋白的核定位。细胞免疫荧光实验显示CCDC106蛋白和p53蛋白在细胞核内共定位。免疫共沉淀实验确定了CCDC106蛋白和p53蛋白在细胞内可以相互作用。我们研究了过表达CCDC106对p53转录活性的影响。结果显示CCDC106过表达可以降低pp53-luc的荧光素酶的活性,表明CCDC106抑制p53的转录活性。为了解释CCDC106抑制p53转录活性的机制,我们将p53表达质粒和不同量的CCDC106表达质粒共转染HeLa细胞,发现随着CCDC106的量的增加,p53蛋白的表达量则降低。为了进一步证明p53表达量的降低是否是因为p53降解所引起,我们又做了蛋白质降解的半衰期实验,发现转染CCDC106表达质粒后p53的降解明显加快。然后我们又用蛋白酶体抑制剂MG-132处理细胞,显示处理后的细胞的p53的表达量有明显回升。这些结果表明,CCDC106可以增强p53的蛋白酶体降解途径。这些研究表明CCDC106蛋白在具有野生型p53的癌细胞中高表达,而CCDC106通过与p53蛋白相互作用,促进p53蛋白的降解,从而导致p53功能失活。因此,CCDC106基因很可能是一个癌基因,CCDC106基因的高表达可能是导致具有野生型p53肿瘤发生的原因之一。