论文部分内容阅读
目的：艾滋病(Acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)在全球已呈爆发性流行趋势,它严重威胁着人类的健康和全球经济的发展。由于缺乏有效的疫苗且临床现有抗艾滋病药物存在价格昂贵、依从性差、易产生耐药性以及不能清除病毒等缺点,探索新的有效的抗艾滋病方法仍是当前研究的热点。光动力疗法(Photodynamic Therapy, PDT)是一种激光医学领域的新方法。早在上世纪90年代,作为血液制品净化的手段,PDT灭活人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)病毒已经成为研究焦点,但是由于受光敏剂副作用以及激光器制造技术落后所限,该研究发展缓慢。近年来新型光敏剂不断问世,激光技术日新月异,为PDT用于艾滋病防治的研究提供了条件。本文将通过研究新型光敏剂血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether, HMME)诱导的PDT对HIV感染的抑制作用,探索PDT防治艾滋病的可能和途径。以HIV-1ⅢB病毒株为代表研究HMME-PDT对HIV病毒复制各个阶段的抑制作用,探索PDT是否具有抗HIV活性及其机制；分析光敏剂、光以及氧对PDT抗HIV活性效应的影响；检测PDT对HIV野生株、耐药株以及各亚型病毒株的抑制效应,评价PDT抗HIV的临床前药效学效应,为PDT在临床上治疗艾滋病提供理论基础和实验依据。方法：1.检测PDT对HIV-1ⅢB急性感染MT4细胞死亡的保护,对HIV-1ⅢB慢性感染H9细胞中P24抗原的抑制,对C8166与HIV-1ⅢB慢性感染H9细胞融合和游离HIV-1ⅢB病毒与C8166细胞融合的抑制,以及对HIV-1ⅢB游离病毒的灭活,探讨PDT的抗HIV活性效应及机制；2.检测不同浓度HMME以及不同功率密度和能量密度下PDT对游离HIV-1ⅢB游离病毒的灭活作用,检测两种抗氧化剂叠氮钠和甘露醇作用下PDT对游离HIV-1ⅢB游离病毒的灭活作用,分析PDT抗HIV活性的影响因素：3.检测PDT对以HIV-1ⅢBA17、HIV-1 L10R/M46I/L63P/V82T/I84V、HIV-1 Protease Gene Mutants RF/V82F/184V、pNL4-3 gp41 (36G) N42S、pNL4-3 gp41 (36G) V38A, N42T为代表的耐药株、以HIV-1KM018和HIV-1SF162为代表的野生株、以及以HIV-2CBL20和HIV-2ROD为代表的2型HIV病毒株的灭活作用,评价PDT抗HIV的临床前药效学效应。结果：1. HMME-PDT能显著抑制HIV诱导的细胞-细胞融合(抑制率64.68%,P<0.05)和病毒-细胞融合(抑制率85%,P<0.05),并对游离病毒有很强的杀伤作用,最高可达到100%(P<0.05)。光动力疗法不能抑制HIV慢性感染H9/HIV-1ⅢB细胞产生P24抗原,不能保护HIV急性感染MT-4细胞的死亡(P>0.05)。2.在一定范围内,HMME-PDT灭活HIV-1ⅢB的效应与光敏剂浓度和能量密度呈正相关,而与功率密度呈反相关；两种抗氧化剂均能抑制HMME-PDT抗HIV-cell膜融合活性,甘露醇的抑制效应大于叠氮钠(P<0.05)。3. HMME-PDT对游离HIV-1ⅢBA17、HIV-1 L10R/M46I/L63P/V82T/I84V、HIV-1 Protease Gene Mutants RF/V82F/184V、pNL4-3 gp41 (36G) N42S、pNL4-3 gp41 (36G) V38A, N42T、HIV-1KM018、HIV-1SF162、HIV-2CBL20和HIV-2ROD等病毒株均有显著的灭活效应,抑制率可高达100%(P<0.05)。结论：HMME-PDT可显著抑制游离HIV-1ⅢB的感染和HIV-1ⅢB诱导的膜融合作用,其灭活游离HIV的效应与光敏剂浓度、激光能量密度、激光功率密度以及抗氧化剂密切相关。HMME-PDT对游离HIV野生株、耐药株和HIV-2亚型病毒株等有限制的灭活效应,显示其临床前药效学效应良好。这些研究结果提示HMME-PDT可能成为治疗艾滋病的一种新方法。