【摘 要】
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硫化氢（Hydrogen sulfide,H2S）是一种新发现的气体信号传递分子,是自噬反应的激动剂,通过多种信号途径激活自噬,从而改善脓毒症心肌及肝脏等器官损伤。肠道作为脓毒症的效应器官之一,H2S能否通过调控自噬相关基因的表达保护脓毒症肠功能目前尚不清楚。目的:研究H2S对脓毒症大鼠肠功能障碍的保护效应及机制。方法:1.30只雄性大鼠随机分为正常组（Control组n=5）、假手术组（Sham
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硫化氢（Hydrogen sulfide,H2S）是一种新发现的气体信号传递分子,是自噬反应的激动剂,通过多种信号途径激活自噬,从而改善脓毒症心肌及肝脏等器官损伤。肠道作为脓毒症的效应器官之一,H2S能否通过调控自噬相关基因的表达保护脓毒症肠功能目前尚不清楚。目的:研究H2S对脓毒症大鼠肠功能障碍的保护效应及机制。方法:1.30只雄性大鼠随机分为正常组（Control组n=5）、假手术组（Sham组n=5）、脓毒症组（CLP组n=5）和CLP+NaHS干预组（n=15）4个组,其中Control组、Sham组和CLP组大鼠仅腹腔内注射1ml/kg NS,CLP+NaHS组NaHS浓度分为3个小组,每组5只,分别经腹腔注射12.5μmol/kg NaHS（低剂量）、25μmol/kg NaHS（中剂量）、50μmol/kg NaHS（高剂量）。2.通过Elisa法检测各组大鼠给药后24h时血清炎性因子HMGB-1、IL-1β表达水平,观察NaHS对各组大鼠炎性因子表达水平的影响。3.取各组大鼠肠黏膜组织,HE染色镜下观察肠黏膜组织病理学及电镜观察线粒体的超微结构,同时通过免疫荧光技术检测肠黏膜CD4、CD8蛋白表达水平;进一步观察脓毒症发生时肠黏膜局部免疫功能、病理学的改变及NaHS干预对肠道功能的影响。4.PCR技术检测各组大鼠肠黏膜自噬相关基因Beclin1、LC3表达水平,电镜观察肠黏膜自噬小体数目的变化。检测脓毒症发生时肠黏膜自噬水平的变化及NaHS对肠黏膜自噬水平的影响。结果:1.在Control和Sham组大鼠中,血浆炎性因子HMGB-1和IL-1β、肠黏膜CD4、CD8蛋白表达水平、自噬小体数量及自噬相关基因Beclin1、LC3的相对表达水平比较均无明显差异（P?>?0.05）,HE染色镜下观察小肠、结肠黏膜完整无损伤,电镜下观察线粒体结构无明显异常。2.与Control和Sham组大鼠相比,CLP组大鼠炎性因子HMGB-1、IL-1β表达水平明显升高,差异显著（P<0.05）,小肠及结肠黏膜自噬相关基因Beclin1、LC3相对表达水平降低（P<0.05）,HE染色光镜观察小肠及结肠黏膜组织破坏明显,可见黏膜腺体层及基层大量炎性细胞浸润,腺管结构紊乱。免疫荧光检测结果表明肠黏膜CD4、CD8蛋白表达水平降低（P<0.05）,电镜结果提示线粒体结构破坏,线粒体嵴水肿增宽,部分可见空泡化,自噬小体数目减少（P<0.05）。3.与CLP组大鼠相比,给予不同浓度NaHS干预的大鼠术后血浆炎性因子HMGB-1、IL-1β表达水平降低,其中以中剂量的NaHS干预时效果最显著（P<0.05）;小肠及结肠黏膜CD4、CD8蛋白相对表达水平降低（P<0.05）;HE染色镜下结果表明当给予低剂量NaHS干预时CLP组大鼠肠黏膜损伤无明显改善,而中、高剂量的NaHS干预后大鼠小肠及结肠黏膜炎性细胞浸润逐渐减轻,肠绒毛排列不齐明显改善,线粒体结构损伤缓解,肠黏膜损伤减轻,其中以高剂量NaHS干预的大鼠肠黏膜损伤缓解最显著;电镜结果提示自噬小体数量增多（P<0.05）,线粒体水肿缓解,肠黏膜损伤减轻;自噬相关基因Beclin1、LC3相对表达水平增加,其中低剂量NaHS干预时无明显影响（P>0.05）,中、高剂量干预后影响显著（P<0.05）。结论:1.脓毒症发生时大鼠血浆炎性因子HMGB-1、IL-1β表达水平升高,肠黏膜损伤明显,其免疫功能及自噬反应受到抑制。2.低浓度H2S可缓解脓毒症大鼠肠黏膜损伤,其机制可能是通过促进自噬相关基因表达增强了肠黏膜细胞的自噬作用。
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