抗人IgM抗体抑制人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤生长的机制研究

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目的:随着各种诊断方式的更新及治疗方法的进步,鼻咽癌目前的5年生存率有了一定提高,但由于鼻咽癌是一类多因素导致的疾病,其发病机制仍不明确,早期诊断困难,总体治疗效果不理想。在前期研究中,我们发现免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)M在多种头颈部肿瘤包括鼻咽癌中存在异位表达,利用抗人IgM抗体干预后人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤的生长受到明显抑制;我们推测IgM对人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤具有生长因子样作用,但其具体机制尚不明确[1,2]。本实验是在前期研究的基础上,获取人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织标本,通过检测移植瘤组织中生存素(Survivin)、增殖细胞核抗原(proliferating cellnuclear antigen,PCNA)、血管生成素-2(angiopoietin,Ang-2)以及移植瘤内微血管密度(microvessel density,MVD)计数情况,进一步探讨抗人IgM抗体抑制人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤生长可能的机制,从而为鼻咽癌发病机制研究以及将抗人IgM抗体应用于鼻咽癌的临床治疗提供理论依据。方法:取人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织,用石蜡包埋瘤体组织,轮转式切片机将其切成4μm厚的病理切片,应用免疫组化链霉亲和素-生物素化过氧化酶复合物染色法(Streptoavidin-biotin-enzymecomplex,SABC)检测瘤体组织中Survivin、PCNA、Ang-2表达情况;染色后在Olympus BH2显微镜下采集图像,每个指标各5张切片,每张采集5张图片,运用Image-pro Plus6.0软件对图片作免疫组化半定量分析,记录平均光密度值。应用免疫组化链霉亲和碱性磷酸酶染色法(Streptavidin-Alkaline Phosphatase,SAP)检测CD31标记的移植瘤内微血管,并计数MVD。实验结果均以均数±标准差(x±s)表达,统计数据运用SPSS16.0for windows软件作统计学分析,P<0.05表示差异有统计学意义。结果:(1)Survivin表达情况:抗人IgM抗体干预组(实验组)Survivin表达的光密度值为(0.153±0.009),IgG对照组Survivin表达的光密度值为(0.221±0.019),PBS对照组Survivin表达的光密度值为(0.246±0.021),实验组Survivin阳性表达的结果显著低于IgG对照组和PBS对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)PCNA表达情况:抗人IgM抗体干预组表达的PCNA平均光密度值为(0.084±0.025),IgG对照组表达的平均光密度值为(0.149±0.016),PBS对照组PCNA表达的平均光密度为(0.163±0.018),实验组PCNA阳性表达的结果显著低于IgG对照组和PBS对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)Ang-2表达情况:抗人IgM抗体干预组Ang-2表达的平均光密度值为(0.121±0.021),IgG对照组Ang-2表达的平均光密度值为(0.188±0.013),PBS对照组的平均光密度为(0.196±0.005),实验组Ang-2阳性表达的结果显著低于IgG对照组和PBS对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)MVD计数情况:抗人IgM抗体干预组MVD为(12.54±0.47),显著低于IgG对照组(16.95±0.21)及PBS对照组(17.17±0.47),差异有统计学意义(P<0.05)。(5)人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织中MVD分别与Survivin和Ang-2呈显著正相关关系,相关系数分别为0.754,0.696,P值分别为0.001,0.004。结论:(1)抗人IgM抗体可以显著抑制人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织内Survivin的表达。(2)抗人IgM抗体可以显著抑制人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤内PCNA的表达。(3)抗人IgM抗体可以显著抑制人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤内Ang-2的表达。(4)抗人IgM抗体可以显著抑制人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织MVD,即抑制血管生成,其机制可能与抑制Ang-2、Survivin的表达有关。(5)抗人IgM抗体抑制人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤生长的机制可能与其促进凋亡、抑制细胞增殖和血管生成有关。
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