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前列腺癌（prostate cancer，PCa）是一种老年男性泌尿系统的疾病，随着生活水平和诊疗手段的不断提高以及我国人口进入老龄化，前列腺癌发病率逐年增高。但是目前的医疗水平，使前列腺癌确诊时基本已是中晚期，而且传统的治疗手段如手术治疗、激素治疗等疗效欠佳，放化疗等治疗方法由于缺乏靶细胞的特异性，对正常的身体组织也会产生严重的破坏，在临床应用上受到一定的限制，克服化疗药物的副作用，提高杀灭癌细胞的特异性，是目前比较重要的研究课题之一。激素非依赖性前列腺癌自噬作用缺失、抗凋亡能力增强可能是其肿瘤细胞增殖的原因。自噬相关基因beclin1是目前新发现的抑癌基因，源于核孤儿受体的小肽NuBCP-9可以促进细胞凋亡，前列腺特异性膜抗原(prostate-specific membraneantigen，PSMA)的适配子能特异地与前列腺癌细胞结合。本课题拟利用链霉亲和素-生物素技术将beclin1与小肽NuBCP-9以及PSMA适配子偶联在一起，特异地增强前列腺癌细胞的自噬和凋亡，试图为前列腺癌的治疗寻找一条有效的新途径。1、构建SA-beclin1原核表达载体从GenBank中检索出核心链霉亲和素Core SA基因的DNA序列后，利用in-Fusion引物设计软件设计含有BamHⅠ酶切位点的SA的特异性引物。以Core SA作为模板，利用PCR技术扩增出SA，长度为381bp。自噬相关基因beclin1已在前期工作中构建入原核表达载体pQE80L，用in-Fusion方法连接PCR产物SA和pQE80L-beclin1，酶切鉴定并送公司测序。SA-beclin1测序结果与预期完全一致，重组载体构建成功，命名为pQE80L-SA-beclin1。2、融合蛋白SA-beclin1的原核表达与纯化将重组载体pQE80-SA-beclin1转化入大肠杆菌Rosetta-gami原核表达菌，用IPTG诱导表达融合蛋白SA-beclin1，通过优化表达条件，选择37℃，IPTG浓度0.5mmol/L，诱导5h。用镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白，Western blot鉴定融合蛋白表达情况。结果显示IPTG诱导后SA-beclin1融合蛋白(含His标签)在大肠杆菌中高效表达。SDS-PAGE分析表达的融合蛋白以包涵体为主，经镍亲和凝胶层析柱纯化得到融合蛋白，Western blot鉴定其相对分子量约为72000，与预期相符。包涵体经变性复性后，亦可得到与目的条带大小相符的蛋白。设计并合成小肽NuBCP-9，并分别标记生物素和FITC，得到纯度>90%的生物素标记小肽NuBCP-9，为后续实验提供基础。以上结果表明，成功构建了重组质粒并表达纯化了SA-beclin1融合蛋白，得到生物素标记的小肽NuBCP-9，为进一步研究SA-beclin1的功能及临床应用奠定了基础。