黑色素瘤作为皮肤癌的一种,恶性程度极高,其导致的死亡率占据了皮肤癌总死亡率的80%以上,并且其发病率在全球范围内与日俱增。在现今常用的治疗方案中,一些化疗药物疗效显著,但其造成的骨髓抑制等不良反应不容忽视,因此开发新型抗黑色素瘤药物对于防治黑色素瘤具有重要意义。在本研究中,基于老药新用原则,我们通过CCK-8技术筛查了FDA批准的1430种小分子化合物,以期找到有效抑制黑色素瘤增殖迁移的药物。终于,我们发现了氯羟喹(CLQ),一种传统的抗结核药物,展现了优良的抗黑色素瘤特性。因此本课题将氯羟喹确定为研究目标,通过EdU掺入法来检测氯羟喹对细胞增殖的影响;此外,我们还通过Wound-healing和Transwell侵袭实验来检测细胞的迁移情况。在分子水平上来说,我们通过Western blot来深入分析细胞增殖标志蛋白,如正调控因子CDK/Cyclin复合体(CDK2/4及CyclinE/D1)和负调控因子CDKN1家族(例如p27和p21)的表达水平,以及迁移相关蛋白,如MMP2、MMP9、ICAM-1、VCAM-1的表达水平。另外。我们还利用生物信息学筛选出氯羟喹的潜在分子靶点,并结合其特异性抑制剂来探究氯羟喹抑制黑色素瘤细胞增殖迁移的分子机制。结果显示,氯羟喹可以在体外剂量依赖性地抑制小鼠黑色素瘤细胞B16F10及人恶性黑色素瘤细胞A375的增殖与迁移,且对小鼠正常黑素细胞Melan-A及人正常表皮黑素细胞PIG1没有影响;我们还通过裸鼠移植瘤及小鼠肺转移实验证明氯羟喹同样可以在体内剂量依赖性地抑制B16F10细胞的增殖与迁移。在分子水平上,氯羟喹能降低增殖相关蛋白CDK2、CDK4、CyclinE、CyclinD1及迁移相关蛋白MMP2、MMP9、ICAM-1、VCAM-1的表达,增加周期抑制因子p21及p27的表达。此外,我们还通过生物信息学筛选得到氯羟喹的潜在分子靶点过氧化物酶体增殖子激活受体γ(PPARγ),且PPARγ的特异性抑制剂GW9662能显著降低氯羟喹抗黑色素瘤功效。另外,我们还发现氯羟喹处理可降低细胞糖酵解速率,即降低了胞外酸化率(ECAR),从而抑制癌细胞沃伯格效应的发生,GW9662同样可以部分解除氯羟喹对肿瘤细胞糖酵解的抑制,说明了PPARγ在氯羟喹抗黑色素瘤过程中发挥了举足轻重的作用。总而言之,本研究发现了氯羟喹可以通过激活PPARγ信号通路,有效抑制黑色素瘤细胞的沃伯格效应,从而起到潜在抗黑色素瘤的作用。