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大球盖菇(Stropharia rugosoannulata)隶属球盖菇科,球盖菇属,是联合国粮农组织(FAO)推荐栽培的食用菌之一。目前关于大球盖菇的研究主要集中在培植技术和活性成分分析,其中大球盖菇多糖的研究又主要在体内外抗氧化活性,该糖的详细化学结构及免疫活性还未见报道。草黄口蘑(Tricholoma lascivum(Fr.)Gillet)隶属白蘑科,口蘑属,是一种珍惜食用真菌。目前关于草黄口蘑的报道主要是分类学地位和形态学特征的研究,而对于其多糖的制备、结构解析和生物活性研究未见报道。本课题以四川阿坝小金县大球盖菇和草黄口蘑子实体为研究对象,采用水煮醇沉法、Sevage法及DEAE-52纤维素法得到大球盖菇和草黄口蘑均一多糖;通过采用GC-MS、HPGPC、HPLC、FT-IR和NMR等技术解析所得多糖的化学结构;采用现代生物技术研究所得多糖的体外免疫及抗肿瘤活性,在此基础之上,通过皮下注射S180细胞构建S180小鼠肿瘤模型评估草黄口蘑多糖体内抗肿瘤能力,并采用Illumina HiScq TM 200技术对S180肿瘤组织进行测序。转录数据采用DESeq2和Cluster Profiler软件进行差异基因及KEGG通路分析,初步探讨草黄口蘑多糖的体内抗肿瘤机制。主要内容和结果如下:(1)分离纯化得到的大球盖菇多糖,命名为SR-1。分子量为13,281 Da,由半乳糖和葡萄糖以3:1的比例构成,(1→6)-α-D-吡喃半乳糖和(1→6,2)-α-D-吡喃半乳糖作为主链,2-O上连接1个(1→6,4)-β-D-吡喃葡萄糖的侧链,侧链葡萄糖4-O和6-O分别连接一个→2)-α-D-葡萄糖。(2)以草黄口蘑子实体为研究对象,采用水煮醇沉法、Sevage法及DEAE-52纤维素法首次从草黄口蘑中得到一种水溶性多糖,将其命名为TLG-1,并对其结构进行了初步解析。红外光谱与核磁共振氢谱结果得出TLG-1是一种重复单元含有4种糖残基的糖类物质。(3)对SR-1和TLG-1的体外免疫活性研究发现,两种多糖均具有一定的免疫活性。相比于空白对照组,在质量浓度2.5-20μg/mL范围内,SR-1和TLG-1均能显著地刺激T淋巴细胞、B淋巴细胞和RAW264.7细胞增殖,并能提高RAW264.7细胞的吞噬活性。此外,SR-1还能显著地促进B淋巴细胞分泌抗体IgA、IgD和IgG以增强机体免疫力(P<0.05)。(4)对SR-1和TLG-1的体外抗肿瘤活性研究发现,与空白对照组比较,在质量浓度2.5-20μg/mL之间,SR-1和TLG-1对CT26.WT结肠癌细胞和MFC胃癌细胞均存在极显著的抑制作用(P<0.01),但抑制程度各不相同。SR-1在质量浓度为10μg/mL时,对两种癌细胞抑制作用最强,抑制率分别为34.03%和33.67%,抑制效果优于TLG-1。TLG-1还能显著抑制S180细胞增殖。(5)TLG-1体内抗肿瘤活性及机制研究发现,与模型组比较发现,TLG-1能显著地抑制S180肿瘤的体内生长,抑制率59%(P<0.01)。对肿瘤组织进行转录测序,经转录组差异基因表达及通路分析发现TLG-1可能是通过MAPK和PI3K-AKT信号通路抑制肿瘤细胞的生长。通过以上的研究,为大球盖菇和草黄口蘑高质化利用寻找新途径,同时为大球盖菇多糖和草黄口蘑多糖的进一步开发利用提供理论依据和技术支撑。