一株枯草芽孢杆菌抗植物病原真菌活性物质的研究

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枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)被认为是一种具有潜在的能有效抑制植物病原真菌并促进植物生长发育作用的有益菌种。目前,已陆续从不同的枯草芽孢杆菌菌株中分离得到具有抑制植物病原真菌生长的脂肽类物质,包括表面活性素(Surfactin)、伊枯草菌素(Iturin)和芬枯草菌素(Fengycin)。本实验室分离得到两株芽孢杆菌RJ-1和RJ-2。通过传统的形态、生理生化鉴定,发现它们与枯草芽孢杆菌特征相符。基于16S rDNA的进一步系统进化分析结果表明,RJ-1和RJ-2均与枯草芽孢杆菌有高度同源性,故鉴定为枯草芽孢杆菌。在RJ-1和RJ-2与植物病原真菌尖孢镰刀菌黄瓜专属型(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum,F.o.c)的平板对峙实验中,RJ-1没有任何的抑菌作用,而RJ-2则表现出强抑菌效果。进一步比较RJ-1和RJ-2摇瓶发酵胞外代谢物粗提液的HPLC谱图,发现RJ-2具有RJ-1所没有的特征代谢产物。使用LC-MS液相质谱联用仪选择性地对RJ-2的这部分特征产物进行质谱分析,推测主要成分的分子量可能是1477.0、1489.1和1505.1,通过肽质量指纹谱技术初步鉴定为C17-18 Fengycin A或者C16-18 Fengycin B。为了更进一步地确定上述结果,我们使用了高精度的生物质谱——MALDI-TOF MS对RJ-2粗提液在枯草芽孢杆菌分泌的脂肽类物质所处的900~1600Da分子量区间内进行了质谱分析,从而发现RJ-2产生的特征代谢物包括一组分子量相差14Da(CH2),含量成阶梯分布的代谢同系物,分子量依次为1462.8、1476.8、1490.8、1504.8和1518.8。通过肽质量指纹谱技术鉴定为C14-18 Fengycin B,其中C17 Fengycin B含量最高,为其主要成分。此外,还发现另一组分子量相差14Da(CH2)的碳链同系物系列,含量同样呈现阶梯分布,分子量依次为1432.8、1446.8、1460.8、1474.8和1488.8,与C14-18 Fengycin A系列对应分子分子量相差2Da,推测可能是Fengycin A的一种异构体,其脂肪酸碳链具有一个双键,具体性质有待进一步分析。
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