【摘 要】
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目的:研究沉默X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)表达在焦脱镁叶绿酸-α甲酯(pyropheophorbide-αmethyl ester,MPPα)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)(MPPα-PDT)处理人骨肉瘤HOS细胞中的作用,并探讨其可能的机制。方法:MPPα-PDT作用于HOS细胞6、12和24 h后,用蛋白质印迹
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目的:研究沉默X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)表达在焦脱镁叶绿酸-α甲酯(pyropheophorbide-αmethyl ester,MPPα)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)(MPPα-PDT)处理人骨肉瘤HOS细胞中的作用,并探讨其可能的机制。方法:MPPα-PDT作用于HOS细胞6、12和24 h后,用蛋白质印迹法检测肌醇依赖酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)-XBP1通路中相关蛋白IRE1α和XBP1的表达水平。采用脂质体转染法将特异性针对XBP1基因的siRNA转入HOS细胞,然后再行MPPα-PDT处理。实验分为空白对照组、siRNA-阴性对照(negative control,NC)组、siRNA-XBP1组、MPPα-PDT组和MPPα-PDT+siRNA-XBP1组,分别用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测各组细胞中XBP1 mRNA和蛋白的表达水平;CCK-8法检测细胞的增殖活性;流式细胞术检测细胞的凋亡率,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白剪切型-caspase 3(Cleaved-caspase 3)和剪切型-聚ADP-核糖聚合酶(Cleaved-poly ADP-ribose polymerase,Cleaved-PARP)的表达水平;最后采用DCFH-DA探针染色法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量以及蛋白质印迹法检测抗氧化相关蛋白过氧化氢酶(Catalase)和超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase 1,SOD1)的表达水平。结果:经MPPα-PDT诱导,HOS细胞中IRE1α和XBP1蛋白的表达水平均上调(P值均<0.05)。siRNA-XBP1可抑制HOS细胞中XBP1mRNA和蛋白的表达水平(P值均<0.01)。沉默XBP1表达可降低HOS细胞的增殖活性(P<0.05),促进细胞凋亡并上调凋亡相关蛋白Cleaved-caspase 3的表达水平(P<0.05),下调抗氧化相关蛋白Catalase和SOD1的表达水平(P<0.05)。与MPPα-PDT组相比,MPPα-PDT+siRNA-XBP1组细胞增殖活性降低(P<0.01),凋亡率增高(P<0.05),凋亡相关蛋白Cleaved-caspase 3和Cleaved-PARP表达水平增高(P值均<0.05),细胞内ROS水平上调(P<0.01),抗氧化相关蛋白Catalase和SOD1的表达水平下调(P值均<0.01)。结论:MPPα-PDT可诱导HOS细胞中IRE1α-XBP1通路激活。沉默XBP1表达可抑制HOS细胞的增殖能力并提高其凋亡水平,同时增强HOS细胞对MPPα-PDT的敏感性,其机制可能与上调细胞内ROS水平以及下调抗氧化分子的表达水平相关。
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