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目的:本研究分为两大部分,第一部分为临床研究,通过检测冠心病患者中高密度脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA)水平与冠脉病变程度、HDL水平的相关性分析,研究冠状动脉病变程度是否与HDL相关酶Lp-PLA水平相关,为Lp-PLA水平是否通过影响HDL功能以及其在冠心病冠脉病变严重程度评估方面提供理论基础。第二部分实验研究,提取冠心病患者及同期健康组的HDL培养肝细胞以及将其静脉注入成年小鼠体内,观察健康及冠心病患者HDL对肝脏中的高密度脂蛋白受体——B族I型清道夫受体(SRBI)表达的影响,以探讨冠心病患者高密度脂蛋白对胆固醇特异性摄取的影响,为冠心病患者功能失调HDL的作用机制提供理论基础。研究失功能HDL在小鼠肝脏的作用,并探讨对SR-BI表达的影响,为失功能高密度胆固醇的作用机制提供实验依据。方法:1、收集2018年6月至2018年12月期间入住山西医科大学第二医院心内科行冠脉造影者,根据临床症状、心电图、酶学指标动态改变及冠脉造影结果,将冠心病组分为心绞痛组及心肌梗死组,并且记录冠脉造影结果中的病变部位及支数;收集同期排除冠心病的正常人为健康体检组。2、收集各组患者血清及一般资料,一般资料包括性别、年龄、糖尿病史、吸烟史、饮酒史,入院第二天清晨空腹12h后抽取静脉血,测定其血糖、血脂、肝肾功能等一般化验指标。3、通过酶联免疫吸附法测定HDL相关酶Lp-PLA水平,评估并将冠心病组按四分位数法分为四组并分别计数,通过计算gensini评分评价冠心病患者冠脉狭窄程度。4、采用SPSS25.0软件进行统计学分析,探讨Lp-PLA是否与冠脉狭窄程度相关,行spearman相关性分析比较HDL相关酶Lp-PLA与冠心病病变程度gensini评分的相关性。比较健康者及冠心病组一般资料及Lp-PLA水平差异,行多因素logistic回归分析,Lp-PLA受否是冠心病的危险因素。根据Gensini评分,≥32分为重度病变,行多因素Logistic回归分析重度病变组冠心病的危险因素,进一步采用受试者工作特征(ROC)曲线评价Lp-PLA诊断冠心病患者发生冠脉狭窄为重度病变的价值。5、利用超高速离心机提取健康体检者、心绞痛患者及心肌梗死患者高密度脂蛋白(HDL)并测浓度、纯化。6、饲养的20只小鼠随机分为对照组、健康体检组、心绞痛组、心肌梗死组,分别将提取健康体检者、心绞痛患者、心肌梗死患者的高密度脂蛋白50mg/L注入各组小鼠尾静脉,每周一次,饲养4周后处死,解剖小鼠肝脏并冰冻切片,利用HE染色观察肝脏组织病理变化并用油红O染色观察肝组织内脂滴情况;提取小鼠肝脏总蛋白,采用蛋白质免疫印迹(western blot)检测以上各组B类I型清道夫受体蛋白表达变化。7、培养肝癌细胞,分为对照组、健康体检组、心绞痛组、心肌梗死组,当细胞密度达80%以上时,将提取健康体检者、心绞痛患者、心肌梗死患者的高密度脂蛋白50mg/L HDL分别干预细胞24h,利用油红O染色评估细胞脂滴情况及提取总蛋白并用western blot检测四组B类I型清道夫受体蛋白相对表达量。8、生物信息学软件检测三组HDL和SRBI蛋白的相关性。结果:1、本研究共纳入239例患者(男性114例,女性125例)。根据临床症状、心电图、酶学及冠脉造影结果将其分为正常对照组及冠心病组。根据Elisa测定Lp-PLA结果将冠心病组以lp-pla2值的四分位数法分为四组:Q1(203-306)36例,Q2(307-561)32例,Q3(562-738)31例,Q4(739-995)30例;2、正常对照组与冠心病组两组间对比性别、年龄、apo B、apo E、脂蛋白α、血糖、尿酸、T4、TSH、比较,差异无统计学差异(P>0.05)。在冠心病组,糖尿病史、HCY、胱抑素C、Lp-PLA水平明显高于正常对照组,差异具有统计学意义(P=0.034、P<0.001,P=0.028,P=0.017);3、冠心病按HDL相关酶Lp-PLA四分法分组基本临床资料比较,四组间年龄、性别、NT-pro BNP、Apo B、apo E、脂蛋白α、尿酸、LDH、Chol、血清磷脂比较差异无统计学差异(P>0.05);HCY、LDL、ds LDL、HDL、apo A、血糖、TG、胱抑素C、甲功比较,差异有统计学差异(P<0.05),且随着lp-pla2水平逐渐增加,HCY逐渐增加,Q4组明显高于Q1-3组,差异具有统计学意义(P<0.05),Q1、Q2、Q3组间差异无统计学意义(P>0.05)。随着lp-pla2水平增加,gensini评分逐渐增加,Q4组明显高于Q1、Q2、Q3组,Q3组明显高于Q1、Q2组,差异均具有统计学意义(P<0.05),Q2高于Q1,但Q1与Q2之间差异不具有统计学意义(P>0.05)。随着lp-pla2水平增加,HDL与Lp-PLA关系无明显趋势,Q4组与Q3组比较明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),其余组别之间差异无统计学意义(P>0.05);4、Spearman相关性分析显示,Elisa测得Lp-PLA与gensini评分呈正相关(rs=0.265,P=0.043),采用逐步向前法将健康对照组与冠心病组相比有统计学意义的指标(是否患糖尿病、HCY、胱抑素C、FT3、ds LDL、apo A、Lp-PLA)行多因素logistic回归分析,lp-pla2是冠心病的危险因素(OR=1.721,P=0.004);5、采用逐步法,行非条件多因素logistic回归。结果表明,Lp-PLA与重度冠心病(gensini评分>32)有关,是重度冠脉狭窄的独立危险因素(OR=3.231,P=0.013)。ROC曲线分析显示Lp-PLA诊断冠心病患者重度冠脉病变(gensini评分>32分)的曲线下面积(AUC)为0.419(95%CI:0.347~0.490)(P=0.049),诊断临界值为269.79,敏感性为76.8%、特异性为42.4%;6、对注射正常人、心绞痛、心肌梗死患者HDL的小鼠,肝脏冰冻切片HE染色观察组织结构无差异;油红O染色检测结果显示注射正常人HDL与对照组相比脂滴明显减少,注射心绞痛及心梗患者HDL与对照组相比脂滴明显增加,注射急性心梗患者HDL与心绞痛患者相比脂滴明显增加;7、动物实验western blot结果表明,注射正常人HDL组小鼠肝脏SRBI蛋白表达水平较对照组小鼠明显增多(P<0.05),心绞痛组小鼠肝脏SRBI蛋白表达水平较健康体检组明显减少(P<0.05),心肌梗死组小鼠肝脏SRBI蛋白表达水平较健康体检组明显减少(P<0.01)。8、对于三种不同来源HDL孵育的肝癌细胞,油红O染色观察结果显示提取自正常人的HDL较对照组肝癌细胞脂滴减少;两组来自冠心病患者的HDL孵育的肝癌细胞较空白对照组肝癌细胞脂滴减少;心肌梗死患者HDL孵育的肝癌细胞较心绞痛患者肝癌细胞脂滴增多;9、细胞实验western blot检测各组SRBI的相对表达量,结果示:与对照组相比,健康人HDL组SRBI相对表达量显著增加(P<0.05),心绞痛及心肌梗死HDL组SRBI相对表达量较少,心肌梗死组较心绞痛组SRBI表达量明显减少(P<0.05)。结论:1、冠心病患者HDL相关酶Lp-PLA水平明显高于正常对照组,并且Lp-PLA水平与冠脉病变程度呈正相关,随着代表冠心病病情严重程度的gensini评分增加,Lp-PLA水平也增加,多因素logistic回归分析,Lp-PLA是重度冠脉病变的独立危险因素,lp-pla2可能在冠心病患者中有致动脉粥样硬化作用。2、健康体检者来源的HDL可以增加小鼠肝脏及肝癌细胞的调控胆固醇逆转运的HDL受体的SRBI蛋白表达,促进胆固醇流出,从而抑制动脉粥样硬化过程。3、冠心病患者HDL抑制小鼠肝脏及肝癌细胞SRBI表达,降低胆固醇清除能力,抑制胆固醇逆转运发生。且随着冠心病病情严重程度增加,HDL胆固醇逆转运功能丧失越严重。