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本研究利用宁夏地区临床型奶牛乳腺炎大肠杆菌临床分离株,采用O抗原平板凝集试验鉴定大肠杆菌优势血清型,应用纸片扩散法对其耐药性进行分析,运用PCR方法对耐药基因以及毒力基因进行检测,并对血清型和耐药性之间的关系,以及irp2、iucA两种毒力基因的序列进行了分析比对,实验结果如下：1.根据GenBank报道的序列,设计大肠杆菌16S rRNA鉴定的通用引物,应用16S rRNA鉴定大肠杆菌的方法,鉴定本实验室收集到的173株临床型奶牛乳腺炎肠杆菌科细菌,最终鉴定出107株大肠杆菌。2.根据相关文献报道,选取30种大肠杆菌O抗原血清,对107株奶牛乳腺炎大肠杆菌临床分离株进行O抗原血清鉴定。鉴定结果表明,107株奶牛乳腺炎大肠杆菌临床分离株中共有78株被鉴定出血清型,优势血清型有0101(15/78)、0158(15/78),另外检出较多的有053(8/78)、010(7/78)、086(5/78)、O92(6/78),占定型株的71.8%,29株未定型。3.采用CLSI推荐的纸片扩散法,对107株临床型奶牛乳腺炎大肠杆菌临床分离株进行了11种药物的药敏试验。结果表明,分离菌株对11种抗菌药物具有不同程度的耐药性,其中对复方新诺明耐药率达到94.4%,对四环素达到90.7%,对庆大霉素达到86.9%,对氨苄青霉素和阿莫西林均达到93.5%,另外对强力霉素,卡那霉素也达到60%以上,其他几种药物也达到较高水平。这107株大肠杆菌共出现53种耐药谱,并未出现1耐、2耐以及11耐的菌株。耐药类型最少的是0耐(仅1株),最高的达到10耐。4.根据GenBank报道的相关序列,设计磺胺类：sull、sul2、sul3;四环素类：tetA、tetB、tetE;氨基糖苷类：aadA1、aadA2、aadB、aadD、aacC2、aacC4、aac(3)-Ⅰa、aac (3)-Ⅱa, aph (3)-Ⅱa;β-内酰胺类：CTX-M、SHV、OXA、TEM;毒力基因：irp2、fyuA、eaeA、ler、F41、LT1、ST1、 iucA、iucB、iutA的PCR反应特异性引物,建立了相应的PCR检测方法。结果表明,该方法灵敏可靠,可以用作临床检测的方法使用。对107株奶牛乳腺炎大肠杆菌临床分离株进行检测,共检测到14种耐药基因,7种毒力基因,分别为,sul1(31.8%)、sul2(37.4%)、sul3(2.8%)、tetA (17.8%)、tetB(14.0%)、aacC2(32.7%)、aacC4(13.1%)、aadA1(9.3%)、aadA2(10.3%). aadB (38.3%)、aac (3)-Ⅱa (27.1%)、CTX-M (10.3%)、OXA (8.4%)、TEM (47.7%)、irp2(49.5%)、fyuA (49.5%)、ler (3.7%)、eaeA (3.7%)、iucA (38.3%)、iucB (56.1%)、iutA (49.5%)。而其他8种基因未检测到。5.对优势血清型0158、0101的30株大肠杆菌,分别扩增其irp2以及iucA两种基因并测序,之后对其序列进行分析,基因序列分析结果表明,两种基因与GenBank报道的序列同源性非常高,irp2达到95.9%以上,而iucA达到98%以上。此外,两种基因的不同序列中均出现规律性的突变,其中irp2基因共出现6种序列,其中有3种序列均出现279位点附近4个碱基的缺失以及531位点的AT突变为TC。全部6种序列中,都在304位点出现A突变为C,343位点C突变为A,346位点A突变为G,376位点A突变为C以及518位点的T突变为C。而iucA基因共出现4种序列,其中iucA-2、iucA-3、iucA-4在751位点出现C突变为G,而iucA-1、iucA-2、iucA-4在1089位点出现T突变为C,4种序列全部在1037,1042,10473个位点出现A突变为G。