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乳腺癌,现今世界威胁女性的头号肿瘤杀手。发病率及死亡率逐年上升,对乳腺癌的预防和治疗已经迫在眉睫。现以不同品类铁观音和茶多酚、EGCG、茶黄素为材料,研究其体外抗人乳腺癌MDA-MB-468细胞的效果和作用机制。清香型铁观音、浓香型铁观音、陈年型铁观音、铁观音茶末和铁观音黄片按照1:25,铁观音鲜叶按照1:6.25的茶叶重量和水体积比进行浸提,过滤除菌后的茶汤作为药物干预原浓度,以不添加药物为正常对照组。EGCG、茶多酚、茶黄素和5-FU用PBS配制成lmg/mL的药物干预储备液,以不添加药物为正常对照组,以5-FU药物干预为阳性对照组。分别利用MTT法检测乳腺癌细胞增殖抑制率、流式细胞术检测乳腺癌细胞凋亡、Western blotting检测乳腺癌凋亡相关蛋白。对不同品类铁观音、EGCG、茶多酚、茶黄素抗乳腺癌的效果和作用机制进行探讨;并检测铁观音主要生化成分的含量,与不同品类铁观音抗乳腺癌的试验结果进行相关性分析。试验结果如下:1、不同品类铁观音抗乳腺癌作用的研究不同品类铁观音对乳腺癌细胞增殖抑制率的影响均呈现剂量依赖关系。在相同干预浓度下,陈年型铁观音对乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖抑制率最高,而铁观音鲜叶的增殖抑制率最低。不同品类铁观音对乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖抑制率的IC50浓度稀释倍数由大到小为:陈年型铁观音(174.95倍)>浓香型铁观音(148.88倍)>清香型铁观音(140.09倍)>铁观音黄片(119.87倍)>铁观音茶末(117.56倍)>铁观音鲜叶(69.60倍)。六组品类铁观音均能明显诱导人乳腺癌MDA-MB-468细胞的凋亡,与正常组相比,六个品类铁观音干预的乳腺癌细胞凋亡比例均显著提高(P<0.05)。其中陈年型铁观音诱导乳腺癌细胞凋亡的比例最高,为28.53%,清香型铁观音诱导乳腺癌细胞凋亡的比例最低,为18.53%。其按照凋亡比例从高到低排序为:陈年型铁观音>浓香型铁观音>铁观音鲜叶>铁观音茶末>铁观音黄片>清香型铁观音。进行抗凋亡蛋白 Bcl-2、Cleaved-caspase 8、Cleaved-caspase 9、Cleaved-caspase 3、Caspase 3这五个细胞凋亡相关蛋白表达水平的检测,与正常对照组相比:铁观音鲜叶、清香型铁观音、陈年型铁观音、浓香型铁观音和铁观音茶末均能显著下调乳腺癌MDA-MB-468细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平(P<0.05)。其中铁观音鲜叶的抑制作用最为明显,下调了 66.17%。清香型铁观音、陈年型铁观音、浓香型铁观音、铁观音黄片和铁观音茶末均能显著提高乳腺癌MDA-MB-468细胞Cleaved-caspase 8蛋白的相对表达水平(P<0.05)。其中清香型铁观音较正常组提高了80%,其按照相对表达水平从高到低排序为:清香型铁观音>铁观音茶末>陈年型铁观音>浓香型铁观音>铁观音黄片>铁观音鲜叶。铁观音鲜叶、浓香型铁观音、铁观音黄片和铁观音茶末均能显著提高乳腺癌MDA-MB-468细胞Cleaved-caspase 9蛋白的相对表达水平(P<0.05)。六组品类铁观音茶试验组均能显著降低乳腺癌MDA-MB-468细胞Caspase 3前体蛋白的表达水平(P<0.05)。但所有茶叶试验组的降低水平都未超过30%。在乳腺癌MDA-MB-468细胞Cleaved-caspase 3蛋白的相对表达水平上,六组品类铁观音茶试验组均显著高于正常组(P<0.05)。其中铁观音鲜叶、铁观音黄片和铁观音茶末提高幅度均超过200%,陈年型铁观音提高幅度最小,为46%。因此,六种不同品类铁观音是通过抑制Bcl-2蛋白的表达,促进Caspase 8或Caspase 9的活化,进而激活Caspase 3,从而诱导乳腺癌MDA-MB-468细胞进入程序性死亡过程,最终诱导细胞凋亡。此为这六种不同品类铁观音能够有效抑制乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖的作用途径。2、茶多酚茶黄素抗乳腺癌作用的研究茶多酚、EGCG、茶黄素对乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖均有明显的抑制作用,且呈剂量依赖关系。在相同干预浓度下,5-FU对乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖抑制效果较好,而茶黄素效果较差。当干预浓度达到80 ug/mL时,EGCG、茶多酚与抗癌药5-FU对乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖抑制率均超过70%以上。茶多酚、EGCG、茶黄素对乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖抑制率的 IC50 浓度由低到高为:5-FU(19.51 ug/mL)EGCG>茶多酚>茶黄素。进行抗凋亡蛋白 Bcl-2、Cleaved-caspase 8、Cleaved-caspase 9、Cleaved-caspase 3、Caspase 3这五个细胞凋亡相关蛋白表达水平的检测,与正常对照组相比:5-FU、EGCG、茶多酚、茶黄素均能显著下调乳腺癌MDA-MB-468细胞中Bcl-2蛋白的相对表达水平(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2的相对表达水平从低到高排序为:茶黄素组<5-FU组茶多酚组>EGCG组>5-FU组。5-FU、EGCG、茶黄素和茶多酚均能显著降低乳腺癌MDA-MB-468细胞Caspase 3前体蛋白的表达水平(P<0.05)。其中茶黄素组较正常组下降幅度最大,为40.28%。5-FU组、EGCG组、茶黄素组和茶多酚组的Cleaved-caspase 3蛋白的表达水平分别为正常组的1.98倍、1.91倍、2.20倍和3.86倍。因此,茶多酚、EGCG、茶黄素均具有很强的诱导乳腺癌MDA-MB-468细胞凋亡的能力。对乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖抑制和诱导凋亡能力,EGCG效果最佳,其次为茶多酚,而茶黄素的效果较差。但是茶多酚、EGCG、茶黄素在促进乳腺癌MDA-MB-468凋亡的作用机制研究中,表现出了一致的趋势,都是通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进促凋亡蛋白Caspase 8、Caspase 9和Caspase 3的活化,进而诱导乳腺癌细胞凋亡。3、不同品类铁观音的生化成分与抗乳腺癌效果的相关性分析由不同品类铁观音的生化成分与抗乳腺癌效果的相关性分析结果显示,各种茶叶的生化成分与对乳腺癌细胞抑制率的IC50、凋亡比例、Cleaved-caspase 9、Cleaved-caspase 3、Caspase 3 蛋白的表达均有一项或者多项以上的极强相关关系(|r|>0.8)。尤其是儿茶素总量,对Caspase 3的表达及活化、以及Cleaved-caspase 3的表达起着至关重要的作用。该结果共同说明了茶浸提物中的多种成分,能够共同对抑制癌细胞的增殖发挥作用。结合茶多酚、EGCG、茶黄素抗乳腺癌MDA-MB-468细胞的作用效果可以发现,EGCG、茶黄素和茶多酚单独作用时也能够对抑制癌细胞的增殖起着良好的作用效果,并且在同为IC50浓度的干预下,茶多酚、EGCG、茶黄素表现出来的诱导细胞凋亡的能力不逊色于不同品类的铁观音茶,其中EGCG更是比不同品类铁观音诱导细胞凋亡的比例更高,其展示了茶功能性成分作用强度的优势,但其需要在较高浓度下才能发挥良好的抗癌作用。