【摘 要】
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研究背景:肝细胞癌（HCC）是世界第六大最常见的癌症,也是导致癌症死亡的第三大原因,2020年肝癌新发病例906,000例,死亡830000例,其中HCC占75%-85%,在中国,肝癌更是是导致癌症死亡的第二大原因。HCC患者的5年生存率为15-38%,这归因于诊断晚、化疗失败和频繁复发。因此,探索肝癌发生发展的详细机制是提高肝癌患者预后的有效手段。微小RNA（miRNA）是一类内源性非编码小RN
【基金项目】
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广东省自然科学基金项目（2018A0303130184）；
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研究背景:肝细胞癌（HCC）是世界第六大最常见的癌症,也是导致癌症死亡的第三大原因,2020年肝癌新发病例906,000例,死亡830000例,其中HCC占75%-85%,在中国,肝癌更是是导致癌症死亡的第二大原因。HCC患者的5年生存率为15-38%,这归因于诊断晚、化疗失败和频繁复发。因此,探索肝癌发生发展的详细机制是提高肝癌患者预后的有效手段。微小RNA（miRNA）是一类内源性非编码小RNA,长度为21-25 NT,与目标mRNA的3’UTR区结合以抑制目标mRNA的转染或降解。基于miRNA谱的证据表明,在HCC进展的各个阶段中均存在miRNA的表达失调。多项分析研究已经得出类似的结论,某些miRNA,例如miR-21,miR-221和miR-222在HCC中往往过度表达。Snail主要包括Snail1、slug及Snai13三种Snail基因。Snail活性主要通过蛋白质的中心部分调节,该部分包含大多数翻译后修饰位点:SRD中的丝氨酸磷酸化位点、两个赖氨酸氧化位点和CRM1依赖的核输出的丝氨酸。糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）是负责SRD区域磷酸化的主要激酶。Snail基因最为人所知的功能是诱导上皮-间质细胞转变（EMT）的表型变化。Snail诱导的EMT将上皮细胞转化为具有迁移特性的间充质细胞,有助于在胚胎发育过程中形成许多组织并获得上皮肿瘤的侵袭特性。研究目的:探讨miR-486-3p表达在HCC中的临床意义,以及miR-486-3p在HCC细胞迁移和侵袭过程中的功能和机制,为进一步阐明和完善HCC中miR-486-3p表达紊乱及其功能异常的分子调控机制。实验方法和结果:首先我们通过qPCR发现了 miR-486-3p在HCC细胞系（HuH7,QGY-7701,HepG2,QGY-7703,SK-HEP-1）及 HCC 样本中的表达量分别低于正常肝细胞系及癌旁组织（ANT）。接下来,通过瞬时转染的技术建立了miR-486-3p过表达及低表达的模型。划痕实验及Transwell实验。实验结果显示miR-486-3p过表达组可明显抑制HCC细胞的侵袭和迁移;相反miR-486-3p低表达组可促进HCC细胞的侵袭和迁移。本研究通过靶基因预测网站TargetScan Release 7.0（http://www.targetscan.org）筛选出 Snail3 3’UTR 区与 miR-486-3p 有两个结合位点。接下来,我们使用双荧光素酶报告系统验证了 miR-486-3p与Snai33’UTR 的结合。miR-486-3p inhibitor 及 miR-486-3p mimics 及其相应的对照组与pGL3/Snail 3’UTR共转染后荧光信号出现了显著的升高及下调（p<0.05）。而miR-486-3pmut组荧光信号无明显改变。除此之外,我们还用Western blot检测发现miR-486-3p的表达上调还可抑制MMP2及MMP9的表达。通过qpcr发现miR-486-3p可抑制Wnt通路靶基因的表达（MMP-2,MMP-9,CD44,RUNX,TCF）。结论:我们的实验发现在肝癌组织或肝癌细胞系中,miR-486-3p表达均降低。miR-486-3p通过直接靶向作用于Snail3以发挥调控HCC的作用。此外miR-486-3p还可以通过下调MMP2以及MMP9抑制HCC的侵袭及迁移。此外miR-486-3p还可以抑制Wnt通路的激活发挥其抑癌作用。
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