松籽油中皮诺敛酸纯化及其抗氧化抗肿瘤研究

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本研究以马尾松为原料,对松籽油进行提取,对松籽油中的皮诺敛酸(PLA)进行分离纯化、鉴定并研究了 PLA的体外抗氧化和抗肿瘤活性,研究结果如下:(1)采用离心提取的方法提取松籽油和回收松籽粕,加热温度85℃,离心转速6500rpm(4487×g),离心时间15min,此条件下,松籽油提取率为60.62%;(2)采用尿素包合法提取PLA,并用GC-MS分析PLA的纯度。尿素:脂肪酸为3.5:1,尿素:乙醇为1:5,包合时间24h,结晶温度0℃下皮诺敛酸得率为22.19%,PLA纯度由原来的20.61%提高到了 72.45%;(3)在尿素包合法的基础上进行硝酸银硅胶柱层析,上样量与吸附剂比例为1:20,流速为1.5~2.0mL/min,此条件下PLA在洗脱剂丙酮石油醚浓度为4%(丙酮占总体积的质量分数)下开始流出,在8%浓度下分离完全,经过柱层析,皮诺敛酸纯度可达到99%以上,皮诺敛酸得率为44.32%;(4)通过红外光谱对纯化的PLA进行官能团分析,确认该纯化物具有双键、羧基、-CH3、-CH2-官能团信息,核磁共振方法通过氢谱、碳谱解析验证了皮诺敛酸的分子结构:CH3(CH2)4CH=CH-CH2-CH=CH(CH2)2CH=CH(CH2)3COOH;(5)PLA的体外抗氧化活性研究表明:PLA在体外对DPPH·和·OH自由基清除几乎没有作用,而对脂质过氧化有明显的抑制能力;(6)皮诺敛酸的体外抗肿瘤活性研究:MTT试验结果表明,皮诺敛酸在一定程度上能够抑制Hela细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,对Hela细胞48h、72h的IC50值分别为45.48μg/mL、38.308μg/mL;通过划痕试验表明PLA在加药48h后有抑制Hela迁移的作用;PLA作用Hela细胞后经HE染色可见细胞凋亡现象;经流式分析部分细胞被阻遏在G0/G1和S期,初步表明PLA具有诱导Hela凋亡的作用。
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